| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 合成生物学及其发展和应用 | 第11-14页 |
| 1.2 代谢工程及其发展和应用 | 第14-16页 |
| 1.3 吲哚丙酮酸的应用和功能 | 第16-18页 |
| 1.3.1 吲哚丙酮酸的应用 | 第16-17页 |
| 1.3.2 吲哚丙酮酸的功能 | 第17-18页 |
| 1.4 吲哚丙酮酸的合成方法 | 第18-19页 |
| 1.4.1 现有的方法及其局限性 | 第18-19页 |
| 1.4.2 TdiD催化反应的优越性 | 第19页 |
| 1.5 生物合成的研究思路 | 第19-20页 |
| 1.6 本研究中的吲哚丙酮酸生物合成 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第21-49页 |
| 2.1 基本仪器信息 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-49页 |
| 2.3.1 溶液、培养基的配制 | 第23-28页 |
| 2.3.1.1 常用抗生素和异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)的配制及使用浓度 | 第23-24页 |
| 2.3.1.2 不同种类培养基的配制 | 第24-26页 |
| 2.3.1.3 缓冲液以及溶液的配制 | 第26-28页 |
| 2.3.2 基因工程实验方法 | 第28-37页 |
| 2.3.2.1 基础实验步骤 | 第28-31页 |
| 2.3.2.2 分子克隆通用方法 | 第31-34页 |
| 2.3.2.3 基因敲除的方法 | 第34-36页 |
| 2.3.2.4 定点突变和基因拼接 | 第36-37页 |
| 2.3.3 高效液相色谱定性定量实验 | 第37-39页 |
| 2.3.4 各种参数的测量方法 | 第39-41页 |
| 2.3.4.1 DNA浓度和纯度 | 第39页 |
| 2.3.4.2 培养常数 | 第39-40页 |
| 2.3.4.3 吲哚丙酮酸 | 第40-41页 |
| 2.3.4.4 氨基酸及其衍生物 | 第41页 |
| 2.3.5 蛋白质纯化及表达实验 | 第41-45页 |
| 2.3.6 各种重组载体的构建 | 第45-47页 |
| 2.3.7 吲哚丙酮酸的生物合成 | 第47-49页 |
| 第三章 实验结果和讨论 | 第49-83页 |
| 3.1 吲哚丙酮酸的性质 | 第49-53页 |
| 3.1.1 稳定性 | 第49-50页 |
| 3.1.2 色素的形成 | 第50-51页 |
| 3.1.3 HPLC鉴定结果 | 第51-53页 |
| 3.2 吲哚丙酮酸的定量方法 | 第53-54页 |
| 3.2.1 Salkowski试剂的可行性 | 第53页 |
| 3.2.2 Salkowski试剂定量的稳定性 | 第53-54页 |
| 3.2.3 色氨酸存在的影响 | 第54页 |
| 3.3 在BL21菌株中生物合成吲哚丙酮酸 | 第54-57页 |
| 3.3.1 生物合成培养基的选择 | 第54-56页 |
| 3.3.2 吲哚丙酮酸的生物合成 | 第56-57页 |
| 3.4 在W3110菌株中生物合成吲哚丙酮酸的代谢工程 | 第57-83页 |
| 3.4.1 重组表达tdiD | 第57-59页 |
| 3.4.2 苯丙酮酸添加实验 | 第59-61页 |
| 3.4.3 增加苯丙酮酸的内源合成量 | 第61-66页 |
| 3.4.4 tdiD~(co)表达水平的优化 | 第66-73页 |
| 3.4.5 tnaA对IPA合成的影响 | 第73-77页 |
| 3.4.6 IPA产量提高的可能影响参数 | 第77-81页 |
| 3.4.6.1 底物浓度 | 第77-78页 |
| 3.4.6.2 培养基的组分以及含量 | 第78-80页 |
| 3.4.6.3 IPA浓度对菌株生长的影响 | 第80-81页 |
| 3.4.7 探讨IPA生物合成中的Trp底物抑制作用 | 第81-83页 |
| 第四章 结论和总结 | 第83-85页 |
| 第五章 课题延伸和扩展-Terrequinone A在大肠杆菌中生物合成的代谢工程 | 第85-99页 |
| 5.1 研究背景 | 第85-91页 |
| 5.2 已完成工作 | 第91-97页 |
| 5.2.1 生产菌株的构建 | 第91-95页 |
| 5.2.2 原宿主菌构巢曲霉的Terrequinone A萃取 | 第95页 |
| 5.2.3 生产菌株培养和Terrequinone A的分离 | 第95-96页 |
| 5.2.4 Terrequinone A的鉴定 | 第96-97页 |
| 5.3 课题展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-107页 |
| 附录 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第111-112页 |
| 缩写表 | 第112页 |
