| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 一 绪论 | 第11-21页 |
| 1 植物启动子研究进展 | 第11-18页 |
| ·启动子概念 | 第11页 |
| ·基本结构 | 第11-12页 |
| ·组成型启动子 | 第12-14页 |
| ·组织特异性启动子 | 第14-15页 |
| ·诱导型启动子 | 第15-18页 |
| 2 PUB19启动子与/rrE基因 | 第18-19页 |
| 3 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 4 技术路线 | 第20-21页 |
| 二 植物表达载体pCambia-PUB19：：IrrE的构建 | 第21-31页 |
| 1 材料 | 第21页 |
| ·载体和菌株 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-26页 |
| ·重组载体的构建策略 | 第21-22页 |
| ·小片段(IrrE基因)的获取 | 第22-24页 |
| ·大片段线性载体(pCambia-PUB19：：)的获取 | 第24页 |
| ·小片段与大片段线性载体的重组连接 | 第24-25页 |
| ·重组载体转化大肠杆菌感受细胞 | 第25页 |
| ·冻融法将重组载体转化农杆菌感受细胞 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-29页 |
| ·IrrE基因片段的扩增 | 第26-27页 |
| ·大片段线性载体(pCambia-PUB19：：)的获取 | 第27页 |
| ·含重组载体的大肠杆菌的获得 | 第27-28页 |
| ·含重组载体的根瘤农杆菌的获得 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| ·酶切、连接和转化效率的影响因素 | 第29-30页 |
| ·工程菌的鉴定 | 第30-31页 |
| 三 PUB19启动子生物信息学分析与植物表达载体油菜转化 | 第31-43页 |
| 1 材料 | 第31页 |
| ·菌株和植物材料 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-34页 |
| ·PUB19启动子生物信息学分析 | 第31-32页 |
| ·油菜的遗传转化 | 第32-33页 |
| ·转基因油菜苗的PCR检测 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-39页 |
| ·PUB19启动子序列上的顺式作用元件 | 第34-35页 |
| ·PUB19启动子转录起始位点的预测 | 第35-38页 |
| ·抗性转基因油菜苗的获得 | 第38-39页 |
| ·转基因油菜的多重PCR检测 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-43页 |
| ·启动子的顺式作用元件分析工具 | 第39-40页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第40-41页 |
| ·转化过程中的玻璃化现象 | 第41-42页 |
| ·多重PCR技术检测转基因阳性苗 | 第42-43页 |
| 四 PUB19启动子驱动IrrE基因的表达特点及转基因植株的抗盐性 | 第43-59页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-47页 |
| ·植株培养与胁迫处理 | 第43-44页 |
| ·转基因油菜叶片中IrrE基因表达水平的检测方法 | 第44-46页 |
| ·生理生化指标检测方法 | 第46-47页 |
| ·数据处理 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-56页 |
| ·PUB19启动子的诱导表达特性 | 第47-48页 |
| ·不同盐浓度胁迫下IrrE基因在转基因植株叶片中的表达 | 第48-49页 |
| ·不同盐浓度胁迫下油菜植株叶片中的抗氧化酶活性 | 第49-51页 |
| ·不同盐浓度胁迫下油菜植株叶片中的脯氨酸含量 | 第51-52页 |
| ·不同盐浓度胁迫下油菜植株叶片中的可溶性蛋白含量 | 第52-53页 |
| ·不同盐浓度胁迫下油菜植株叶片中的可溶性糖含量 | 第53-54页 |
| ·不同盐浓度胁迫下油菜植株叶片中的丙二醛含量 | 第54-55页 |
| ·不同盐浓度胁迫下植株叶片中的相对电导率 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| ·PUB19启动子驱动IrrE基因的诱导表达特性 | 第56页 |
| ·PUB19启动子驱动IrrE基因在盐胁迫下的表达特性 | 第56-57页 |
| ·IrrE基因的表达对植株叶片抗氧化酶活性的影响 | 第57-58页 |
| ·IrrE基因的表达对植株叶片细胞渗透调节能力的影响 | 第58页 |
| ·IrrE基因的表达对植株叶片细胞膜结构稳定性的影响 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及研究成果 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 1 培养基 | 第72-74页 |
| ·菌用培养基 | 第72页 |
| ·植物组织培养用培养基 | 第72-74页 |
| 2 生长素、抗生素等保存液 | 第74-75页 |
