| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-16页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-29页 |
| ·猪表皮生长因子的发现及研究进展 | 第17-20页 |
| ·表皮生长因子的发现 | 第17页 |
| ·猪表皮生长因子的特性 | 第17-18页 |
| ·乳源性表皮生长因子 | 第18-19页 |
| ·表皮生长因子受体 | 第19-20页 |
| ·表皮生长因子的生物功能与应用 | 第20-22页 |
| ·对动物肠道健康的作用 | 第20-21页 |
| ·在临床治疗中的作用 | 第21-22页 |
| ·在美容方面的作用 | 第22页 |
| ·表皮生长因子研究进展 | 第22页 |
| ·早期断奶的仔猪应激 | 第22-26页 |
| ·猪现代化养殖现状 | 第23页 |
| ·早期断奶带来的危害 | 第23-24页 |
| ·早期断奶的经济损失 | 第24页 |
| ·早期断奶仔猪应激及应对措施 | 第24-26页 |
| ·益生菌（酿酒酵母）与动物肠道健康的研究进展 | 第26-28页 |
| ·酿酒酵母的特点 | 第26页 |
| ·酿酒酵母与肠道健康 | 第26-27页 |
| ·外源性补充酿酒酵母的研究 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第28-29页 |
| 第2章 胞内、胞外及含标签EGF在酿酒酵母的克隆表达及鉴定分析 | 第29-50页 |
| 摘要 | 第29-30页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·试验动物 | 第30页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·限制性内切酶及工具酶 | 第30页 |
| ·试剂盒 | 第30页 |
| ·核酸分子量标准 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-43页 |
| ·主要溶液的配制 | 第31-32页 |
| ·目的基因克隆 | 第32-34页 |
| ·真核分泌表达载体的构建 | 第34-39页 |
| ·重组表皮生长因子的诱导表达 | 第39页 |
| ·重组目的蛋白（EGF）的定量和鉴定 | 第39页 |
| ·Tricine‐SDS‐Page蛋白质电泳操作 | 第39-41页 |
| ·重组表皮生长因子的Western blot鉴定 | 第41-42页 |
| ·EGF蛋白纯化及定量 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-48页 |
| ·真核表达载体[pYES2‐Mfα‐spEGF (TAA+), pYES2‐spEGF (TAA‐), 及pYES2‐ spEGF (TAA+)]的构建 | 第43-44页 |
| ·重组酿酒酵母的生长曲线、pH变化值和不同时间点目的蛋白表达水平 | 第44-45页 |
| ·重组表皮生长因子的鉴定与定量分析 | 第45-48页 |
| ·讨论 | 第48页 |
| ·真核表达载体pYES2‐Mfα‐spEGF(TAA+)、pYES2‐spEGF (TAA+)、pYES2‐ spEGF(TAA‐) 的成功构建 | 第48页 |
| ·重组酿酒酵母INVSc1‐EE(+)、INVSc1‐IE(+)、INVSc1‐TE(‐)高效分泌表达重组目的蛋白 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 第3章 胞内EGF、胞外EGF及含HIS标签EGF在断奶SD大鼠体内外生物学活性的比较分析 | 第50-63页 |
| 摘要 | 第50-51页 |
| ·材料与方法 | 第51-54页 |
| ·试验材料 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·数据统计分析 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-60页 |
| ·重组表皮生长因子对断奶SD大鼠的肠上皮细胞活性检测 | 第54-55页 |
| ·重组酿酒酵母INVSc1‐EE(+)、INVSc1‐IE(+)及INVSc1‐TE(‐)在断奶SD大鼠小肠内活性检测 | 第55-57页 |
| ·重组酿酒酵母INVSc1‐EE(+)、INVSc1‐IE(+)及INVSc1‐TE(‐)对断奶SD大鼠生产性能的影响 | 第57页 |
| ·重组酿酒酵母INVSc1‐EE(+)、INVSc1‐IE(+)及INVSc1‐TE(‐)对断奶SD大鼠肠道发育的影响 | 第57-59页 |
| ·重组酿酒酵母INVSc1‐EE(+)、INVSc1‐IE(+)及INVSc1‐TE(‐)对断奶SD大鼠血液理化指标及免疫功能的影响 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| ·重组EGF在断奶SD大鼠在体内外的生物学活性探讨 | 第60-61页 |
| ·不同表达形式EGF在断奶SD大鼠体内外活性的比较分析 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第4章 胞内EGF、胞外EGF及含HIS标签EGF在断奶仔猪体内外生物学活性的比较分析 | 第63-77页 |
| 摘要 | 第63-64页 |
| ·材料与方法 | 第64-68页 |
| ·试验动物与分组设计 | 第64页 |
| ·日粮组成及营养水平 | 第64页 |
| ·饲养管理 | 第64页 |
| ·指标测定 | 第64-68页 |
| ·数据处理及统计分析 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-76页 |
| ·重组表皮生长因子对猪肠上皮细胞活性检测 | 第68-69页 |
| ·重组酵母INVSc1‐EE(+)、INVSc1‐IE(+)及INVSc1‐TE(‐)在断奶仔猪小肠内活性检测 | 第69-71页 |
| ·重组酵母INVSc1‐EE(+)、INVSc1‐IE(+)及INVSc1‐TE(‐)对断奶仔猪生产性能的影响 | 第71页 |
| ·重组酵母INVSc1‐EE(+)、INVSc1‐IE(+)及INVSc1‐TE(‐)对断奶仔猪肠道发育的影响 | 第71-75页 |
| ·重组酵母INVSc1‐EE(+)、INVSc1‐IE(+)及INVSc1‐TE(‐)对断奶仔猪血液理化指标及免疫功能的影响 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第5章 比较分析不同表达形式EGF的重组酵母对断奶仔猪消化代谢、肠道菌群、肠道粘膜酶活力及MRNA表达水平 | 第77-104页 |
| 摘要 | 第77-78页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·酶与生化试剂 | 第78页 |
| ·常备溶液和相关缓冲液 | 第78页 |
| ·试验仪器设备和型号 | 第78-79页 |
| ·方法 | 第79-85页 |
| ·消化代谢指标测定 | 第79页 |
| ·DGGE检测肠道菌群 16S rDNA‐V3区域 | 第79-82页 |
| ·SYBR‐荧光实时定量PCR鉴定 | 第82-85页 |
| ·结果与分析 | 第85-100页 |
| ·比较不同表达形式EGF的重组酵母对断奶仔猪消化代谢的影响 | 第85-86页 |
| ·比较不同表达形式EGF的重组酵母对断奶仔猪肠道黏膜相关酶酶活的影响 | 第86-89页 |
| ·比较不同表达形式EGF的重组酵母对断奶仔猪肠道粘膜膜相关基因mRNA表达水平的影响 | 第89-92页 |
| ·比较不同表达形式EGF的重组酵母对断奶仔猪肠道微生物菌群数量及结构的影响 | 第92-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| ·探讨不同表达形式EGF的重组酵母对断奶仔猪的消化代谢效率及肠道菌群的影响 | 第100-101页 |
| ·探讨不同表达形式EGF的重组酵母对断奶仔猪的肠道酶的酶活力及mRNA表达水平、EGF‐R的mRNA表达水平的影响 | 第101-102页 |
| ·探讨肠道发育与肠道菌群之间的关系 | 第102页 |
| ·小结 | 第102-104页 |
| 结论与展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 附录 | 第114-119页 |
| 作者简历 | 第119-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
