| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 缩略语词汇表 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-45页 |
| 1 蛋白酶抑制剂的功能和分类 | 第19-20页 |
| ·蛋白酶抑制剂的定义和功能 | 第19-20页 |
| ·蛋白酶抑制剂的分类 | 第20页 |
| 2 丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第20-26页 |
| ·丝氨酸蛋白酶的分类 | 第20-26页 |
| ·典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第21-25页 |
| ·Kunitz家族 | 第22页 |
| ·Bowman-Birk家族 | 第22-23页 |
| ·Kazal家族 | 第23-24页 |
| ·Potato 1和Potato 2家族 | 第24-25页 |
| ·非典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第25页 |
| ·Serpin类丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第25-26页 |
| 3 Serpin超级家族的研究进展 | 第26-36页 |
| ·Serpin家族抑制剂在原核生物及病毒中的的研究 | 第26-27页 |
| ·Serpin家族抑制剂在真核生物中的的研究 | 第27-28页 |
| ·Serpin家族的进化起源假说 | 第28-29页 |
| ·Serpin的结构 | 第29-30页 |
| ·Serpin家族的抑制机理 | 第30-32页 |
| ·Serpin的活性丧失和疾病相关 | 第32-34页 |
| ·关于活性中心环状区(reactive centre loop)的研究 | 第34-36页 |
| 4 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展 | 第36-40页 |
| ·家蚕SPIs的分布与功能研究 | 第36-38页 |
| ·家蚕SPIs基因的研究 | 第38-39页 |
| ·家蚕serpin基因的研究 | 第39-40页 |
| 5 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究方法 | 第40-43页 |
| ·蛋白质组学研究 | 第40-41页 |
| ·定点突变技术 | 第41-42页 |
| ·酶学功能研究 | 第42页 |
| ·蛋白质结构分析 | 第42-43页 |
| 本文研究的目的与意义 | 第43-45页 |
| 第二章 家蚕体壁中胰蛋白酶抑制剂的分离、纯化以及性质鉴定 | 第45-53页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要方法 | 第45-47页 |
| ·家蚕中总蛋白的提取 | 第45-46页 |
| ·亲和层析纯化 | 第46页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第46页 |
| ·十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第46页 |
| ·明胶-活性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Gelatine-Native-PAGE) | 第46-47页 |
| ·家蚕体壁中胰蛋白酶抑制剂的热稳定性研究 | 第47页 |
| ·家蚕体壁中胰蛋白酶抑制剂的酸碱稳定性研究 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-51页 |
| ·家蚕体壁中TIs的分离纯化 | 第47-48页 |
| ·家蚕体壁和体液中TIs的明胶活性电泳分析 | 第48-49页 |
| ·家蚕体壁中TIs的热稳定性研究 | 第49-50页 |
| ·家蚕体壁中TIs的酸碱稳定性 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 家蚕体壁中胰蛋白酶抑制剂的质谱分析 | 第53-63页 |
| 1 材料与方法 | 第53-54页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·主要方法 | 第53-54页 |
| ·亲和层析产物蛋白的SDS-PAGE分析 | 第53页 |
| ·质谱鉴定 | 第53-54页 |
| ·序列比对分析与功能预测 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-60页 |
| ·家蚕体壁TIs的纯化和SDS-PAGE检测 | 第54-55页 |
| ·质谱分析结果 | 第55-56页 |
| ·生物信息学分析 | 第56-60页 |
| 3 讨论 | 第60-63页 |
| 第四章 家蚕serpin.类抑制剂SW-AT-1的克隆及活性分析 | 第63-83页 |
| 1 材料与方法 | 第63-71页 |
| ·实验菌株和载体 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要方法 | 第63-71页 |
| ·家蚕体壁RNA的提取 | 第63-64页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第64-65页 |
| ·SW-AT-1基因序列克隆 | 第65页 |
| ·PCR扩增片段产物的回收 | 第65-66页 |
| ·克隆载体与目的片段的连接 | 第66页 |
| ·大肠杆菌DHSa感受态细胞的准备 | 第66-67页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接产物转化 | 第67-68页 |
| ·克隆载体的测序与分析 | 第68页 |
| ·载体质粒的提取 | 第68页 |
| ·SW-AT-1目的片段和表达载体pET-28a的双酶切 | 第68-69页 |
| ·目的片段和表达载体的连接转化 | 第69页 |
| ·重组蛋白SW-AT-1的原核表达 | 第69页 |
| ·SW-AT-1重组表达蛋白的纯化 | 第69-70页 |
| ·SDS-PAGE检测纯化蛋白 | 第70页 |
| ·胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的抑制活性测定 | 第70页 |
| ·抑制剂常数的测定 | 第70-71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-80页 |
| ·家蚕体壁总RNA的检测 | 第71页 |
| ·SW-AT-1原核表达载体构建的检测, | 第71-74页 |
| ·PCR序列扩增回收结果 | 第71-72页 |
| ·双酶切回收产物的检验 | 第72-73页 |
| ·pET28a-SW-AT-1表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·SW-AT-1重组蛋白在大肠杆菌C43菌株中的表达 | 第74-76页 |
| ·重组蛋白的鉴定 | 第74-75页 |
| ·纯化结果 | 第75-76页 |
| ·重组SW-AT-1蛋白的抑制活性测定结果 | 第76-80页 |
| ·抑制活性测定结果 | 第76-77页 |
| ·热稳定性 | 第77-78页 |
| ·酸碱稳定性 | 第78-80页 |
| ·抑制剂常数Ki的确定 | 第80页 |
| 3 讨论 | 第80-83页 |
| 第五章 SW-AT-1的结构与功能研究 | 第83-109页 |
| 1 材料与方法 | 第83-88页 |
| ·实验材料 | 第83页 |
| ·主要试剂 | 第83页 |
| ·主要仪器 | 第83页 |
| ·主要方法 | 第83-88页 |
| ·SW-AT-1的结构模拟 | 第83-84页 |
| ·SW AT-1定点突变载体的构建 | 第84-87页 |
| ·突变体蛋白的异源表达和纯化 | 第87页 |
| ·突变体的酶活测定 | 第87页 |
| ·圆二色谱法测定蛋白结构 | 第87-88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-105页 |
| ·SW-AT-1模拟结构 | 第88-92页 |
| ·SW AT-1突变体载体构建验证 | 第92-94页 |
| ·SW-AT-1突变体的重组蛋白表达和纯化结果 | 第94-95页 |
| ·SW-AT-1突变体的活性测定 | 第95-97页 |
| ·SW-AT-1的圆二色谱分析 | 第97-105页 |
| ·温度对SW-AT-1结构的影响 | 第97-99页 |
| ·pH对SW-AT-1结构的影响 | 第99-101页 |
| ·SW-AT-1突变体结构的变化 | 第101-103页 |
| ·温度对SW-AT-1突变体结构的影响 | 第103-105页 |
| 3 讨论 | 第105-109页 |
| 全文结论 | 第109-111页 |
| 创新之处 | 第111-113页 |
| 存在问题与展望 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-135页 |
| 攻读博士学位期间发表与投送的论文 | 第135-137页 |
| 致谢 | 第137页 |
