| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-22页 |
| 1 木薯生产现状 | 第11-12页 |
| ·木薯栽培现状 | 第11页 |
| ·木薯的经济价值及用途 | 第11-12页 |
| ·病害是制约木薯产业发展的重要因素之一 | 第12页 |
| 2 植物先天免疫反应 | 第12-17页 |
| ·病原物的PAMPs和植物的PRRs | 第13-14页 |
| ·PAMPs激活的免疫信号通路 | 第14-15页 |
| ·BIKI在植物先天免疫的激活与调控中必不可少 | 第15-17页 |
| 3 木薯的组织培养及遗传转化的研究进展 | 第17-20页 |
| ·木薯的组织培养 | 第17-19页 |
| ·分生组织培养 | 第18页 |
| ·成熟器官培养 | 第18-19页 |
| ·体细胞胚状体培养 | 第19页 |
| ·木薯的遗传转化 | 第19-20页 |
| ·农杆菌介导的木薯遗传转化 | 第20页 |
| ·基于FEC的转化体系 | 第20页 |
| 4 本研究的目的和研究内容 | 第20-21页 |
| 5 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 木薯类受体激酶基因MEBIK1的分离及在拟南芥中的功能鉴定 | 第22-39页 |
| 1 材料与方法 | 第22-29页 |
| ·试验材料 | 第22-24页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株及载体 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22页 |
| ·原生质体提取及转化所用试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·木薯叶片总RNA的提取及反转录 | 第24页 |
| ·RT-PCR扩增MeBIK1基因的全长CDs序列 | 第24-25页 |
| ·候选基因的诱导表达分析 | 第25页 |
| ·载体构建 | 第25-26页 |
| ·氯化铯密度梯度离心法大量提取质粒 | 第26-27页 |
| ·拟南芥原生质体制备及亚细胞定位分析 | 第27-28页 |
| ·拟南芥同源基因缺失突变体的遗传互补 | 第28页 |
| ·转基因拟南芥的获得及鉴定 | 第28-29页 |
| ·转基因拟南芥植株的抗病性检测 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-37页 |
| ·木薯叶片总RNA提取 | 第29页 |
| ·候选基因MeBIK1编码一个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 | 第29-31页 |
| ·MeBIK1定位在细胞膜上 | 第31-32页 |
| ·MeBIK1基因受Flg22诱导表达 | 第32-33页 |
| ·MeBIK1能恢复拟南芥突变体的PTI反应 | 第33-34页 |
| ·转MeBIK1基因拟南芥的获得及表达检测 | 第34-35页 |
| ·转基因拟南芥抗病表型鉴定 | 第35-37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| ·MeBIK1是一个类受体胞质激酶 | 第37-38页 |
| ·MeBIK1在抗PstDC300和XamHN004中的表型不一致 | 第38-39页 |
| 第三章 木薯遗传转化体系的构建及转MEBIK1基因植株的获得 | 第39-53页 |
| 1 材料与方法 | 第39-42页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·菌株及载体 | 第39页 |
| ·药品试剂 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-42页 |
| ·木薯无菌苗的获得 | 第40页 |
| ·腋芽的诱导培养 | 第40页 |
| ·体细胞胚的诱导以及成熟 | 第40页 |
| ·不同浓度picloram诱导不同木薯品种体细胞胚的产生 | 第40-41页 |
| ·脆性胚性愈伤组织(FEC)的诱导 | 第41页 |
| ·植株再生 | 第41页 |
| ·报告基因pCAMBIA1301-gus及目的基因MeBIK的转化 | 第41页 |
| ·转化后植株的再生 | 第41-42页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-51页 |
| ·不同浓度2,4-D和picloram对诱导体细胞胚的影响 | 第42-44页 |
| ·2,4-D的不同浓度对诱导体细胞胚的影响 | 第42-43页 |
| ·picloram的不同浓度对诱导体细胞胚的影响 | 第43-44页 |
| ·五个木薯品种在picloram不同浓度下体细胞胚的诱导情况 | 第44-45页 |
| ·诱导成熟脆性胚性愈伤FEC的最佳picloram浓度的筛选 | 第45-46页 |
| ·农杆菌菌液浓度和侵染时间对木薯FEC存活率的影响 | 第46页 |
| ·转化植株的再生 | 第46-48页 |
| ·转基因木薯植株的鉴定 | 第48-51页 |
| ·报告基因的gus染色及PCR检测 | 第48-49页 |
| ·目的基因MeBIK1的荧光检测 | 第49-50页 |
| ·目的基因MeBIK1的PCR检测 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| ·生长素浓度对木薯体细胞胚产量差异较大 | 第51页 |
| ·转化时间及菌液浓度对FEC存活率有较大影响 | 第51-53页 |
| 第四章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 | 第59-63页 |
| 附录一 | 第59页 |
| 附录二 | 第59页 |
| 附录三 | 第59-61页 |
| 附录四 | 第61-63页 |
| 发表的文章 | 第63页 |
| 致谢 | 第63页 |
