| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-27页 |
| ·核苷酸类物质简介 | 第10-11页 |
| ·核苷酸类物质合成方法介绍 | 第11-16页 |
| ·传统的合成方法介绍 | 第11页 |
| ·基于能量循环的核苷酸合成 | 第11-14页 |
| ·本实验室前期的研究 | 第14-16页 |
| ·多酶反应体系的介绍 | 第16-19页 |
| ·蛋白(酶)共表达体系的实现 | 第19-20页 |
| ·全细胞合成的研究 | 第20-21页 |
| ·脱氧胸苷酸和脱氧胸苷三磷酸的研究 | 第21-25页 |
| ·脱氧胸苷酸(dTMP)和脱氧胸苷三磷酸(dTTP) | 第21-22页 |
| ·dTMP和dTTP合成原理及设计 | 第22-23页 |
| ·生物合成反应中涉及的三种酶 | 第23-25页 |
| ·研究意义及流程 | 第25-27页 |
| 第2章 联合胸苷激酶及乙酸激酶合成脱氧胸苷酸 | 第27-35页 |
| ·材料与方法 | 第27-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·实验生化试剂 | 第28页 |
| ·实验仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-33页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第30-31页 |
| ·重组菌酶活分析 | 第31-32页 |
| ·多酶体系合成dTMP | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-35页 |
| 第3章 联合胸苷酸激酶及乙酸激酶合成脱氧胸苷三磷酸 | 第35-40页 |
| ·材料与方法 | 第35-36页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·实验生化试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-39页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| ·重组菌蛋白含量测定及比活分析 | 第37页 |
| ·多酶体系合成dTTP | 第37-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第4章 胸苷激酶及乙酸激酶共表达菌的构建及应用 | 第40-46页 |
| ·材料与方法 | 第41页 |
| ·共表达重组菌的构建 | 第41页 |
| ·酶活检测 | 第41页 |
| ·dTMP的生物合成 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-44页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第41-42页 |
| ·重组菌酶活分析 | 第42-43页 |
| ·利用共表达重组菌合成dTMP | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 第5章 胸苷酸激酶及乙酸激酶共表达菌的构建及应用 | 第46-51页 |
| ·材料与方法 | 第46页 |
| ·共表达重组菌的构建及诱导表达 | 第46页 |
| ·酶活检测 | 第46页 |
| ·dTTP的生物合成 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-49页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第46-48页 |
| ·重组菌酶活分析 | 第48页 |
| ·利用共表达重组菌pAT合成dTTP | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-51页 |
| 第6章 共表达菌完整细胞渗透性的研究及应用 | 第51-59页 |
| ·材料与方法 | 第51-52页 |
| ·菌株和质粒 | 第51页 |
| ·实验试剂 | 第51页 |
| ·实验仪器 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51页 |
| ·酶活检测 | 第51-52页 |
| ·dTMP和dTTP的生物合成 | 第52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-57页 |
| ·不同浓度的渗透化试剂对酶活的影响 | 第52-54页 |
| ·不同的处理时间对酶活的影响 | 第54-56页 |
| ·利用渗透化全细胞p28TA和p28AT生物合成dTMP | 第56-57页 |
| ·利用渗透化的全细胞pAT生物合成dTTP | 第57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 第7章 TKase、TMKase和ACKase三基因共表达的研究 | 第59-63页 |
| ·材料与方法 | 第59-60页 |
| ·菌株和质粒 | 第59页 |
| ·重组菌的构建 | 第59-60页 |
| ·dTTP的生物合成 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-62页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第60-61页 |
| ·一步合成dTTP反应的无效性分析 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第8章 结论与展望 | 第63-65页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| ·展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附录Ⅰ | 第73页 |
