| 摘要 | 第1-5页 |
| abstract | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-19页 |
| ·四氢嘧啶羟化酶的研究背景 | 第8-12页 |
| ·四氢嘧啶及5-羟基四氢嘧啶概述 | 第8页 |
| ·四氢嘧啶-酶作用底物 | 第8-9页 |
| ·5-羟基四氢嘧啶-酶作用产物 | 第9-11页 |
| ·四氢嘧啶及5-羟基四氢嘧啶应用研究 | 第11-12页 |
| ·四氢嘧啶羟化酶概述 | 第12-13页 |
| ·四氢嘧啶羟化酶的来源 | 第12-13页 |
| ·四氢嘧啶羟化酶功能性研究进展 | 第13页 |
| ·四氢嘧啶羟化酶结构的研究进展 | 第13页 |
| ·蛋白质结构研究技术路线 | 第13-17页 |
| ·蛋白质的表达与分离纯化 | 第13-14页 |
| ·蛋白质结构研究方法 | 第14-17页 |
| ·本课题的研究意义及内容 | 第17-19页 |
| ·研究意义 | 第17-18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-39页 |
| ·实验材料 | 第19-24页 |
| ·基因 | 第19页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·表达载体 | 第19页 |
| ·实验耗材 | 第19-20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·实验试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·主要溶液 | 第22-24页 |
| ·实验方法 | 第24-39页 |
| ·生物信息学分析 | 第24页 |
| ·重组质粒的构建 | 第24-30页 |
| ·EctD的表达与纯化 | 第30-34页 |
| ·EctD结晶条件的筛选与优化 | 第34-37页 |
| ·EctD晶体X射线衍射数据的收集与处理 | 第37-38页 |
| ·EctD晶体结构的解析与修正 | 第38页 |
| ·EctD与辅底物α-酮戊二酸、底物四氢嘧啶复合物的结晶 | 第38-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-54页 |
| ·生物信息学分析 | 第39页 |
| ·重组质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·PCR扩增 | 第39页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第39-41页 |
| ·EctD的表达与纯化 | 第41-46页 |
| ·EctD的小量试表达 | 第41页 |
| ·EctD的Ni-NTA亲和层析 | 第41-43页 |
| ·EctD的分子筛层析 | 第43-44页 |
| ·EctD的离子交换层析 | 第44-46页 |
| ·EctD结晶条件的筛选与优化 | 第46-49页 |
| ·EctD结晶条件的筛选 | 第46-48页 |
| ·EctD结晶条件的优化 | 第48-49页 |
| ·EctD晶体衍射数据的收集与处理 | 第49-50页 |
| ·EctD晶体的结构解析与修正 | 第50-53页 |
| ·EctD与辅底物α-酮戊二酸、底物四氢嘧啶复合物的结晶 | 第53-54页 |
| 4 结论 | 第54-55页 |
| 5 展望 | 第55-56页 |
| 6 参考文献 | 第56-63页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第63-64页 |
| 8 致谢 | 第64页 |