| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-18页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的来源 | 第8-9页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的功能 | 第9页 |
| ·丙氨酸脱氢酶空间结构的研究 | 第9-12页 |
| ·空间结构 | 第9-10页 |
| ·丙酮酸的结合位点 | 第10-11页 |
| ·NAD~+的结合位点 | 第11-12页 |
| ·丙氨酸脱氢酶的催化机理 | 第12-13页 |
| ·正反应-氧化脱氨 | 第12页 |
| ·逆反应-氨化生成氨基酸 | 第12-13页 |
| ·蛋白质晶体的研究 | 第13-16页 |
| ·蛋白质结晶方法的研究进展 | 第13页 |
| ·提高蛋白质结晶筛选成功率的方法 | 第13-15页 |
| ·蛋白质构象的方法研究 | 第15-16页 |
| ·丙氨酸脱氢酶研究的现状及意义 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-34页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·基因、菌株和载体 | 第18页 |
| ·实验仪器 | 第18-19页 |
| ·实验试剂 | 第19页 |
| ·常用的培养基和缓冲液 | 第19-21页 |
| ·实验方法 | 第21-34页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)重组质粒的构建 | 第21-24页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)的表达纯化及酶活性测定 | 第24-27页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)单晶的结晶条件筛选及优化 | 第27-30页 |
| ·Ald和NAD~+二元共晶的结晶条件筛选及优化 | 第30-31页 |
| ·Ald、NAD~+和丙酮酸三元共晶的结晶条件筛选及优化 | 第31-32页 |
| ·Ald、NAD~+、NADH和丙酮酸四元共晶的结晶条件筛选及优化 | 第32-33页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)的晶体结构解析 | 第33-34页 |
| 3 结果与讨论 | 第34-57页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)重组质粒构建结果 | 第34-35页 |
| ·重组质粒构建的结果 | 第34页 |
| ·重组质粒鉴定的结果 | 第34-35页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)的表达纯化及酶活性测定结果 | 第35-39页 |
| ·Ald试表达和可溶性检测结果 | 第35-37页 |
| ·Ald初步分离及纯化结果 | 第37-38页 |
| ·Ald阴离子交换层析结果 | 第38-39页 |
| ·Ald活性测定结果 | 第39页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)单晶的结晶条件筛选及优化结果 | 第39-41页 |
| ·Ald单晶的结晶条件初步筛选 | 第39-40页 |
| ·Ald单晶的结晶条件优化 | 第40-41页 |
| ·丙氨酸脱氢酶(Ald)单晶的数据收集和处理及结构解析 | 第41-44页 |
| ·Ald单晶的数据收集及处理 | 第41-43页 |
| ·Ald单晶的结构解析 | 第43-44页 |
| ·Ald和NAD~+二元共晶的结晶条件筛选及优化结果 | 第44-46页 |
| ·二元共晶的结晶条件初步筛选 | 第44-45页 |
| ·二元共晶的结晶条件优化 | 第45-46页 |
| ·Ald和NAD~+二元共晶的晶体数据收集和处理及结构解析 | 第46-50页 |
| ·Ald和NAD~+二元结晶的晶体数据收集及处理 | 第46-47页 |
| ·Ald和NAD~+二元结晶的结构解析 | 第47-50页 |
| ·Ald、NAD~+和丙酮酸三元共晶的结晶条件筛选及优化结果 | 第50-52页 |
| ·三元共晶的结晶条件初步筛选 | 第50-51页 |
| ·三元共晶的结晶条件优化 | 第51-52页 |
| ·Ald、NAD~+和丙酮酸三元共晶的晶体数据收集及处理 | 第52-53页 |
| ·Ald、NAD~+、丙酮酸和NADH四元共晶的结晶条件筛选及优化结果 | 第53-54页 |
| ·四元共晶的结晶条件初步筛选 | 第53页 |
| ·四元共晶的结晶条件优化 | 第53-54页 |
| ·不同来源的丙氨酸脱氢酶(Ald)比较 | 第54-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-65页 |
| 7 攻读学位期间发表的文章 | 第65-66页 |
| 8 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67页 |
