| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 缩略词 | 第6-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-39页 |
| ·口蹄疫 | 第11-29页 |
| ·口蹄疫与其流行现状 | 第11-16页 |
| ·口蹄疫病毒的基因组构成 | 第16-18页 |
| ·口蹄疫病毒的结构 | 第18-19页 |
| ·口蹄疫病毒的感染周期 | 第19-24页 |
| ·口蹄疫的发病机制 | 第24-28页 |
| ·口蹄疫的防控 | 第28-29页 |
| ·RNA干扰 | 第29-37页 |
| ·RNA干扰的发现 | 第29-30页 |
| ·RNA干扰的分子机制 | 第30-34页 |
| ·RNA干扰与基因功能分析和基因治疗 | 第34-35页 |
| ·RNAi与抗病毒感染 | 第35-37页 |
| ·RNAi在抗FMDV中的研究 | 第37-38页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二章 材料方法 | 第39-55页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·生物材料 | 第39页 |
| ·实验仪器及耗材 | 第39-40页 |
| ·实验试剂及溶液配制 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-54页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第41-42页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第42页 |
| ·质粒DNA小量制备(OMEGA质粒提取试剂盒) | 第42-43页 |
| ·酶切产物的胶回收(Qiaquick胶回收试剂盒) | 第43页 |
| ·DNA片段的连接 | 第43页 |
| ·去内毒素质粒的大量提取(OMEGA去内毒素大量提取试剂盒) | 第43-44页 |
| ·组织和细胞基因组提取(使用Qiagen DNeasy Blood & Tissue Kit) | 第44-45页 |
| ·PCR反应条件及体系 | 第45页 |
| ·Southern Blotting | 第45-47页 |
| ·细胞复苏 | 第47-48页 |
| ·细胞传代培养 | 第48-49页 |
| ·细胞冻存 | 第49页 |
| ·电转制备转基因细胞 | 第49-50页 |
| ·转基因细胞系的筛选 | 第50页 |
| ·检测病毒效价 | 第50-51页 |
| ·检测攻毒前后转基因细胞shRNA表达水平 | 第51页 |
| ·IBRS-2/BHK-21转基因细胞上检测攻毒后细胞样品病毒效价的测定 | 第51页 |
| ·细胞病变效应(CPE)检测及细胞内病毒复制动力学检测 | 第51-52页 |
| ·体细胞核移植制备转基因克隆猪 | 第52页 |
| ·转基因克隆猪攻毒验证抗FMDV能力 | 第52-53页 |
| ·血液组织中的病毒量检测 | 第53页 |
| ·抗体检测 | 第53页 |
| ·IFN-γ mRNA的定量分析 | 第53-54页 |
| ·流式细胞技术分析免疫细胞 | 第54页 |
| ·统计分析 | 第54-55页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第55-101页 |
| ·构建口蹄疫病毒特异性shRNA表达载体 | 第55-58页 |
| ·转基因细胞系的建立及筛选 | 第58-61页 |
| ·shRNA转基因细胞有稳定的siRNAs表达并能显著地抗抵口蹄疫病毒感染 | 第61-70页 |
| ·检测攻毒前后细胞shRNA表达水平变化 | 第61页 |
| ·攻毒前后病毒滴度(TCID_(50))水平的变化 | 第61页 |
| ·细胞病变效应与病毒复制动力学 | 第61-70页 |
| ·制备转基因克隆猪并鉴定shRNA的表达 | 第70-74页 |
| ·体细胞核移植制备转基因克隆猪和非转基因克隆猪 | 第70页 |
| ·克隆猪的分子检测 | 第70-74页 |
| ·shRNA转基因克隆猪抵抗口蹄疫病毒感染效果的攻毒验证 | 第74-99页 |
| ·预实验确定病毒SID_(50) | 第74页 |
| ·攻毒实验分组 | 第74-75页 |
| ·临床症状的分析和体温变化情况 | 第75-80页 |
| ·血毒症消长动力学 | 第80-81页 |
| ·屠宰后组织带毒鉴定 | 第81-89页 |
| ·攻毒后猪的抗体应答分析 | 第89-92页 |
| ·攻毒后猪血液中的IFN-γ的变化分析 | 第92页 |
| ·攻毒后猪血液中的免疫细胞的变化分析 | 第92-97页 |
| ·攻毒后猪血液中口蹄疫病毒序列的变化分析 | 第97-99页 |
| ·小结 | 第99-101页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第101-105页 |
| 结论 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 附录 | 第115-118页 |
| 致谢 | 第118-121页 |
| 个人简历 | 第121-122页 |
