| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| ·立题的背景 | 第10页 |
| ·人心肌肌钙蛋白Ⅰ的概述 | 第10-17页 |
| ·人心肌肌钙蛋白Ⅰ的分子生物学特性 | 第10-12页 |
| ·人心肌肌钙蛋白Ⅰ在临床上的应用 | 第12-15页 |
| ·人心肌肌钙蛋白Ⅰ的测定 | 第15-16页 |
| ·cTnI检测的影响因素 | 第16-17页 |
| ·人心肌肌钙蛋白Ⅰ重组工程菌的构建、表达及其抗体制备 | 第17页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| ·本论文的立题依据与研究内容 | 第18-19页 |
| ·立题依据 | 第18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 2 实验材料和方法 | 第19-46页 |
| ·实验材料和试剂 | 第19-24页 |
| ·酶及相关试剂 | 第19页 |
| ·菌液 | 第19-20页 |
| ·实验动物与细胞 | 第20页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·主要缓冲液、试剂、凝胶和培养基的制备 | 第21-24页 |
| ·蛋白纯化缓冲液的配制 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-46页 |
| ·重组菌株(BL21-pET11a-cTnI)的构建 | 第24-29页 |
| ·目的蛋白cTnI的表达 | 第29-32页 |
| ·抗原蛋白cTnI的纯化 | 第32-34页 |
| ·pET28a-cTnI-BL21重组表达菌株的构建 | 第34-36页 |
| ·检测蛋白(His-cTnI)的表达和纯化 | 第36-38页 |
| ·动物免疫 | 第38-40页 |
| ·杂交瘤细胞的制备 | 第40-43页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第43-45页 |
| ·cTnI单克隆抗体性质的检测 | 第45-46页 |
| 3 结果与讨论 | 第46-73页 |
| ·pET-11a-cTnI重组质粒的构建 | 第46-49页 |
| ·双酶切回收目的基因片段和载体pET-11a片段 | 第46-47页 |
| ·克隆菌株中重组质粒酶切鉴定 | 第47页 |
| ·pETl la-cTnl- BL21(DE3)基因测序验证 | 第47-49页 |
| ·目的蛋白cTnI的获取 | 第49-59页 |
| ·目的蛋白cTnI的试表达 | 第49页 |
| ·目的蛋白cTnI表达形式的确定 | 第49-50页 |
| ·诱导条件对目的蛋白cTnI表达的影响 | 第50-53页 |
| ·Plackett-Burman实验及结果 | 第53-56页 |
| ·等高线图和立体分析 | 第56-58页 |
| ·目的蛋白cTnI最佳表达工艺参数的验证试验 | 第58页 |
| ·测定蛋白浓度的标准曲线 | 第58-59页 |
| ·目的蛋白cTnI纯化结果 | 第59-62页 |
| ·Q-Sepharose FF柱纯化 | 第59-60页 |
| ·苯基疏水柱(Phenyl-Sepharose FF)纯化 | 第60页 |
| ·纯化情况验证 | 第60-61页 |
| ·纯化目的蛋白性质的鉴定 | 第61-62页 |
| ·pET28a-cTnI重组质粒的构建 | 第62-63页 |
| ·目的基因片段和载体pET28a大片段 | 第62页 |
| ·克隆菌E.coli(DH5a)中重组质粒的酶切鉴定 | 第62-63页 |
| ·检测蛋白His-cTnI的获取 | 第63-66页 |
| ·检测蛋白的表达 | 第63-64页 |
| ·检测蛋白His-cTnI的纯化 | 第64-65页 |
| ·检测蛋白His-cTnI性质鉴定 | 第65-66页 |
| ·BALB/c小鼠免疫 | 第66-67页 |
| ·ELISA检测免疫小鼠效价 | 第66页 |
| ·融合的免疫脾脏 | 第66-67页 |
| ·细胞融合 | 第67-68页 |
| ·单克隆杂交瘤细胞的筛选 | 第68-69页 |
| ·首次筛选融合结果(HAT培养基筛选) | 第68-69页 |
| ·杂交瘤细胞的亚克隆化 | 第69页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第69-70页 |
| ·抗体纯化 | 第70页 |
| ·单克隆抗体性质的鉴定 | 第70-73页 |
| ·抗体效价和浓度测定 | 第70-71页 |
| ·cTnI单克隆抗体特异性的测定 | 第71-73页 |
| 4 结论 | 第73-75页 |
| ·重组表达菌株pET11a-cTnI-BL21的构建 | 第73页 |
| ·目的蛋白cTnI的表达及其表达条件优化 | 第73页 |
| ·目的蛋白cTnI的纯化及其性质的测定 | 第73页 |
| ·pET28a-cTnI重组质粒的构建 | 第73-74页 |
| ·His-cTnI检测蛋白的表达及纯化 | 第74页 |
| ·动物免疫及其效价的测定 | 第74页 |
| ·cTnI单克隆抗体的制备和纯化 | 第74页 |
| ·cTnI单克隆抗体的性质鉴定 | 第74-75页 |
| 5 展望 | 第75-76页 |
| 6 参考文献 | 第76-82页 |
| 7 攻读硕士期间论文发表情况 | 第82-83页 |
| 8 致谢 | 第83页 |
