| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 英文缩略表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| ·脂肪酶概述 | 第9-14页 |
| ·脂肪酶的研究历史 | 第9页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第9-10页 |
| ·脂肪酶的理化性质 | 第10-11页 |
| ·脂肪酶的结构 | 第11-12页 |
| ·催化机制 | 第12页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第12-14页 |
| ·嗜热脂肪酶的研究进展 | 第14-16页 |
| ·嗜热微生物与嗜热机制 | 第14-15页 |
| ·嗜热酶与嗜热脂肪酶的研究进展 | 第15-16页 |
| ·嗜热真菌与嗜热真菌脂肪酶的研究进展 | 第16页 |
| ·脂肪酶基因的异源表达系统 | 第16-18页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第16-17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第17-18页 |
| ·本研究的内容和立题依据 | 第18-20页 |
| ·主要内容 | 第19页 |
| ·立题依据 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-43页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·菌株、载体、试剂、仪器 | 第20-21页 |
| ·引物合成和核酸测序 | 第21-22页 |
| ·溶液 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-43页 |
| ·高温脂肪酶产生菌的初筛 | 第24页 |
| ·高温脂肪酶产生菌的复筛 | 第24-25页 |
| ·真菌基因组DNA的提取 | 第25页 |
| ·产脂肪酶菌株的ITS序列的扩增与菌株鉴定 | 第25-27页 |
| ·脂肪酶基因的同源克隆 | 第27-28页 |
| ·cDNA的获得 | 第28-32页 |
| ·脂肪酶基因的原核表达 | 第32-37页 |
| ·脂肪酶基因的真核表达与性质测定 | 第37-43页 |
| 3 结果与讨论 | 第43-64页 |
| ·脂肪酶产生菌株的初筛结果 | 第43页 |
| ·脂肪酶产生菌株的复筛结果 | 第43页 |
| ·P1菌株ITS序列的扩增、分析及菌株鉴定 | 第43-44页 |
| ·P1菌脂肪酶基因的同源克隆与序列分析 | 第44-54页 |
| ·脂肪酶基因的原核表达 | 第54-55页 |
| ·脂肪酶基因的真核表达与性质测定 | 第55-64页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第55页 |
| ·脂肪酶基因在Pichia pastoris GS115中的表达 | 第55-56页 |
| ·重组脂肪酶的发酵 | 第56页 |
| ·重组脂肪酶SDS-PAGE检测及分离纯化 | 第56-58页 |
| ·重组脂肪酶比活力的测定 | 第58-59页 |
| ·重组脂肪酶的酶学性质 | 第59-61页 |
| ·不同化学试剂及其金属离子对重组脂肪酶酶活力的影响 | 第61-63页 |
| ·重组脂肪酶Lip09动力学参数 | 第63页 |
| ·重组脂肪酶Lip09底物特异性 | 第63-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-73页 |
| 7 攻读硕士学位期间论文发表情况 | 第73-74页 |
| 8 致谢 | 第74页 |