| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 缩略语表 | 第17-20页 |
| 第1章 文献综述 | 第20-50页 |
| ·猪圆环病毒概述 | 第20-21页 |
| ·PCV1 | 第20页 |
| ·PCV2 | 第20-21页 |
| ·PCV生物学特性 | 第21页 |
| ·PCV2基因组成 | 第21-22页 |
| ·PCV2基因结构 | 第21-22页 |
| ·PCV2蛋白质功能 | 第22页 |
| ·病毒复制 | 第22-24页 |
| ·复制因子 | 第23-24页 |
| ·先导链复制原点 | 第23-24页 |
| ·REP复合物 | 第24页 |
| ·PCV2起源与演化 | 第24-25页 |
| ·PCV2的传播途径 | 第25页 |
| ·PCV2感染与临床疾病 | 第25-29页 |
| ·猪圆环病毒相关疾病 | 第25-29页 |
| ·断奶仔猪多系统衰竭综合征 | 第25-26页 |
| ·猪皮炎肾病综合征 | 第26页 |
| ·猪呼吸道疾病综合征 | 第26-27页 |
| ·繁殖障碍 | 第27页 |
| ·肉芽肿性肠炎 | 第27-28页 |
| ·渗出性皮炎 | 第28页 |
| ·坏死性淋巴结炎 | 第28页 |
| ·先天性震颤 | 第28-29页 |
| ·与其他病原混合感染 | 第29页 |
| ·PCV2致病机理 | 第29-34页 |
| ·PCV2复制机理 | 第29-30页 |
| ·淋巴细胞衰竭和免疫抑制 | 第30-32页 |
| ·PCV2感染和凋亡 | 第30-31页 |
| ·PCV2毒力的基因决定性 | 第31页 |
| ·免疫增强诱发PCVAD | 第31-32页 |
| ·与宿主免疫系统的相互作用 | 第32-34页 |
| ·感染免疫细胞 | 第32-33页 |
| ·IL-10和其他细胞因子在PCV2感染中的作用 | 第33页 |
| ·病毒与宿主蛋白的相互作用 | 第33-34页 |
| ·病毒DNA与宿主蛋白的相互作用 | 第34页 |
| ·PCV2诊断 | 第34-35页 |
| ·PCV2疫苗研究进展 | 第35页 |
| ·泛素蛋白酶体途径概述 | 第35-36页 |
| ·泛素蛋白酶体的组成元件 | 第36-46页 |
| ·泛素 | 第36-37页 |
| ·泛素蛋白酶体途径相关的酶 | 第37-40页 |
| ·E1激活酶 | 第37-38页 |
| ·E2结合酶 | 第38页 |
| ·E3连接酶 | 第38-39页 |
| ·解离酶 | 第39-40页 |
| ·蛋白酶体 | 第40-43页 |
| ·蛋白酶体的结构与作用机制 | 第41-42页 |
| ·蛋白酶体的细胞定位 | 第42-43页 |
| ·蛋白酶体激活物 | 第43-44页 |
| ·PA700 | 第43页 |
| ·PA28 | 第43-44页 |
| ·PA200 | 第44页 |
| ·蛋白酶体抑制剂 | 第44-46页 |
| ·化学合成的蛋白酶体抑制剂 | 第44-45页 |
| ·天然蛋白酶抑制剂 | 第45-46页 |
| ·靶蛋白泛素化和降解信号 | 第46页 |
| ·泛素蛋白酶体途径的功能 | 第46-50页 |
| ·调节细胞周期 | 第46-47页 |
| ·癌症和细胞存活 | 第47页 |
| ·炎性应答 | 第47页 |
| ·免疫应答 | 第47-48页 |
| ·蛋白的错误折叠 | 第48页 |
| ·内质网相关的降解 | 第48页 |
| ·疾病进程 | 第48-50页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第50-51页 |
| 第3章 实验材料与方法 | 第51-66页 |
| ·实验材料 | 第51-54页 |
| ·细胞、毒株与菌株 | 第51页 |
| ·载体与质粒 | 第51页 |
| ·主要培养基和溶液的配制 | 第51-52页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第52-53页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂的配制 | 第53-54页 |
| ·主要实验器材 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-66页 |
| ·PCV2增殖 | 第54页 |
| ·细胞活力的测定 | 第54页 |
| ·病毒感染 | 第54-55页 |
| ·病毒DNA提取 | 第55页 |
| ·分子克隆技术 | 第55-59页 |
| ·PCR扩增 | 第55-56页 |
| ·PCR产物或酶切反应的电泳检测 | 第56页 |
| ·PCR产物或酶切产物的回收 | 第56页 |
| ·DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第57页 |
| ·连接产物的转化 | 第57页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第57-58页 |
| ·质粒的大量制备 | 第58页 |
| ·质粒DNA浓度的测定 | 第58-59页 |
| ·RNA提取 | 第59-60页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第59页 |
| ·DNase Ⅰ处理 | 第59页 |
| ·cDNA合成 | 第59-60页 |
| ·实时绝对荧光定量PCR | 第60-61页 |
| ·标准质粒的制备 | 第60页 |
| ·绝对荧光定量PCR | 第60-61页 |
| ·实时相对荧光定量PCR | 第61页 |
| ·转染 | 第61-62页 |
| ·目的蛋白在真核细胞中表达的检测(Western blot方法) | 第62-63页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第62页 |
| ·细胞核蛋白的提取 | 第62-63页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第63页 |
| ·Western blot | 第63页 |
| ·流式细胞术分析细胞周期和Sub-G1 | 第63-64页 |
| ·蛋白酶体活性的测定 | 第64页 |
| ·NF-κB荧光素酶活性检测 | 第64页 |
| ·间接免疫荧光 | 第64-65页 |
| ·共聚焦技术 | 第65页 |
| ·荧光蛋白标记的共定位 | 第65页 |
| ·统计学方法 | 第65-66页 |
| 第4章 实验结果与分析 | 第66-94页 |
| ·感染PCV2猪肺泡巨噬细胞蛋白质组学差异蛋白的验证 | 第66-74页 |
| ·PCV2感染及病毒滴度的测定 | 第66页 |
| ·差异蛋白的动态学变化 | 第66-67页 |
| ·差异蛋白的相对定量验证 | 第67-71页 |
| ·差异蛋白的Western blot验证 | 第71-73页 |
| ·差异蛋白β-tubulin与PCV2 ORF2共定位分析 | 第73-74页 |
| ·泛素蛋白酶体途径对PCV2复制的影响 | 第74-77页 |
| ·细胞活力的测定 | 第74页 |
| ·蛋白酶体抑制剂影响PCV2复制 | 第74-75页 |
| ·蛋白酶体抑制剂对PCV2不同复制阶段的影响 | 第75-77页 |
| ·蛋白酶体抑制剂对细胞周期的影响 | 第77-78页 |
| ·PCV2感染对泛素蛋白酶体途径的影响 | 第78-80页 |
| ·PCV2感染促进细胞内蛋白质的泛素化 | 第79页 |
| ·PCV2感染对蛋白酶体糜蛋白酶样活性的影响 | 第79-80页 |
| ·针对泛素的siRNA降低PCV2增殖滴度 | 第80-81页 |
| ·泛素蛋白酶体途径相关蛋白(PSME1和PSMB2)与PCV2的相互作用 | 第81-89页 |
| ·构建真核质粒pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2 | 第81-83页 |
| ·基因PSME1和PSMB2的扩增 | 第81-82页 |
| ·真核质粒pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2的构建 | 第82-83页 |
| ·真核质粒pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2的鉴定 | 第83页 |
| ·真核质粒pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2对PCV2复制的影响 | 第83-85页 |
| ·真核质粒pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2对PCV2滴度的影响 | 第84页 |
| ·真核质粒pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2促进ORF2的表达 | 第84-85页 |
| ·真核质粒pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2对NF-κB信号通路的作用 | 第85-88页 |
| ·pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2对NF-κB荧光素酶活性的影响 | 第85页 |
| ·pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2诱导IκBα的降解和p65的核转位 | 第85-86页 |
| ·真核质粒pcDNA-PSME1和pcDNA-PSMB2对炎性因子的影响 | 第86-88页 |
| ·NF-κB信号通路抑制剂BAY对PSMB2增强病毒滴度的影响 | 第88-89页 |
| ·BAY对细胞活力的影响 | 第88-89页 |
| ·BAY对转染PSMB2 PK15细胞中PCV2滴度的影响 | 第89页 |
| ·PSME1、PSMB2与ORF2、ORF3的共定位 | 第89-94页 |
| ·荧光质粒pEGFP-ORF2、pEGFP-ORF3和DsRed-PSME1、DsRed-PSMB2的扩增 | 第89-90页 |
| ·重组质粒pEGFP-ORF2、ORF3和DsRed-PSME1、PSMB2的构建 | 第90-91页 |
| ·荧光质粒DsRed-PSME1、PSMB2和pEGFP-ORF2、ORF3的鉴定 | 第91-92页 |
| ·荧光质粒pEGFP-ORF2、pEGFP-ORF3和DsRed-PSME1、DsRed-PSMB2的共定位 | 第92-94页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第94-100页 |
| ·讨论 | 第94-99页 |
| ·PCV2感染引起猪肺泡巨噬细胞功能变化 | 第94-95页 |
| ·泛素蛋白酶体途径是PCV2早期有效复制所必需的 | 第95-96页 |
| ·抑制泛素蛋白酶体途径降低PCV2滴度 | 第96页 |
| ·蛋白酶体抑制剂降低PCV2转录和翻译 | 第96页 |
| ·泛素蛋白酶体途径调节细胞周期进程 | 第96-97页 |
| ·PCV2感染与细胞内蛋白质泛素化相关 | 第97页 |
| ·PSME1调节细胞内炎性因子 | 第97-98页 |
| ·PSMB2经由NF-κB信号通路促进PCV2增殖 | 第98页 |
| ·泛素蛋白酶体途径和猪圆环病毒相关疾病 | 第98-99页 |
| ·结论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-127页 |
| 附录 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
