| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-29页 |
| 第一节 蛋白酶体的研究概况 | 第14-17页 |
| ·蛋白酶体的结构 | 第14-16页 |
| ·蛋白酶体的激活机制 | 第16-17页 |
| 第二节 泛素连接酶E3Smurfl的研究概况 | 第17-21页 |
| ·Smurf1的生物学作用 | 第17-19页 |
| ·C2结构域的生物学意义 | 第19-21页 |
| 第三节 人源蛋白酶体激活因子REG γ研究概况 | 第21-25页 |
| ·REG家族的发现及特征 | 第21-23页 |
| ·REG γ的生物学功能 | 第23-24页 |
| ·REG γ人类疾病中的重要作用 | 第24-25页 |
| 第四节 本论文的研究内容 | 第25-26页 |
| ·Smurf1-C2结构域的晶体学及功能研究 | 第25-26页 |
| ·人源蛋白酶体激活因子REG γ的晶体学及功能研究 | 第26页 |
| 第五节 本课题的研究意义 | 第26-28页 |
| ·Smurf1-C2结构域的研究意义 | 第26-27页 |
| ·人源蛋白酶体激活因子REG γ的研究意义 | 第27-28页 |
| 第六节 论文的结构安排 | 第28-29页 |
| 第二章 Smurf1中C2结构域的晶体学研究 | 第29-50页 |
| 第一节 C2结构域的分子克隆与原核表达纯化 | 第29-34页 |
| ·C2结构域的原核表达载体的构建 | 第29-32页 |
| ·C2结构域的原核表达 | 第32页 |
| ·C2结构域蛋白的纯化 | 第32-34页 |
| 第二节 C2结构域蛋白的晶体筛选及优化 | 第34-37页 |
| ·蛋白质结晶的原理及筛选方法 | 第34-35页 |
| ·C2蛋白的晶体筛选 | 第35-36页 |
| ·C2蛋白的晶体优化 | 第36-37页 |
| 第三节 C2蛋白的晶体数据收集处理及结构解析 | 第37-44页 |
| ·C2蛋白晶体的数据收集及处理 | 第38-39页 |
| ·C2蛋白晶体结构解析 | 第39-40页 |
| ·C2蛋白结构模型的质量评估 | 第40-44页 |
| 第四节 C2蛋白的结构分析 | 第44-50页 |
| ·C2蛋白结构的总体特征 | 第44-46页 |
| ·Smurf1-C2蛋白结构潜在的磷脂结合位点 | 第46-50页 |
| 第三章 Smurf1-C2结构域在Smurf1的细胞定位研究 | 第50-54页 |
| 第一节 Smurf1-C2突变体的构建 | 第50-51页 |
| 第二节 Smurf1及突变体的细胞定位 | 第51-52页 |
| 第三节 Smurf1-C2结构域的生物学功能总结 | 第52-54页 |
| 第四章 REG γ的晶体学研究 | 第54-80页 |
| 第一节 REG γ的原核表达载体构建与表达 | 第54-57页 |
| ·REG γ原核表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·REG γ蛋白的原核表达 | 第56-57页 |
| 第二节 人源REG γ重组蛋白的纯化 | 第57-62页 |
| ·重组蛋白REG γ的亲和层析 | 第57-58页 |
| ·重组蛋白REG γ的阴离子交换层析 | 第58-60页 |
| ·重组蛋白REG γ的凝胶过滤层析 | 第60-62页 |
| 第三节 REG γ蛋白晶体的筛选及优化 | 第62-67页 |
| ·REG γ蛋白晶体的筛选 | 第62-63页 |
| ·REG γ蛋白晶体的鉴定 | 第63-65页 |
| ·REG γ蛋白晶体的优化 | 第65-67页 |
| 第四节 REG γ蛋白晶体的数据收集处理及结构解析 | 第67-69页 |
| ·REG γ晶体的数据收集处理 | 第67-68页 |
| ·REG γ蛋白的结构解析 | 第68-69页 |
| 第五节 REG γ蛋白结构模型的评估 | 第69-74页 |
| ·REG γ结构模型与相应的电子密度的检测 | 第70-71页 |
| ·REG γ结构模型的R_(work)与R_(free) | 第71页 |
| ·REG γ结构模型二面角构象的Ramachandran分布图 | 第71-72页 |
| ·REG γ结构模型温度因子的分布 | 第72-74页 |
| 第六节 REG γ蛋白总体结构特征及与REG a蛋白的结构比对 | 第74-80页 |
| ·REG γ分析超速离心 | 第74-75页 |
| ·REG Y蛋白的总体结构特征 | 第75-77页 |
| ·REG Y蛋白与REG α蛋白的结构比对 | 第77-80页 |
| 第五章 REG γ-linker突变体的晶体学研究 | 第80-98页 |
| 第一节 REG γ-linker的克隆与原核表达 | 第80-84页 |
| ·REG γ-linker的分子克隆 | 第80-81页 |
| ·REG γ-linker的原核表达及纯化 | 第81-83页 |
| ·REG γ-linker蛋白的晶体筛选及优化 | 第83-84页 |
| 第二节 REG γ-linker蛋白晶体的数据收集处理及结构解析 | 第84-85页 |
| ·REG γ-linker晶体的数据收集处理 | 第84-85页 |
| ·REG γ-linker蛋白的结构解析 | 第85页 |
| 第三节 REG γ-linker蛋白结构模型的评估 | 第85-89页 |
| ·REG γ-linker结构模型与相应的电子密度的检测 | 第85-87页 |
| ·REG γ-linker结构模型二面角构象的Ramachandran分布 | 第87-88页 |
| ·REG γ-linker结构模型温度因子分布 | 第88-89页 |
| 第四节 REG γ-linker蛋白结构的特征 | 第89-92页 |
| ·REG γ-linker蛋白的结构特征 | 第89-91页 |
| ·REG γ-linker与REG γ的结构比对 | 第91-92页 |
| 第五节 REG γ-linker与REG γ的功能检测 | 第92-96页 |
| ·REG γ-linker与REG γ的细胞定位 | 第92-94页 |
| ·REG γ-linker与REG γ对蛋白酶体的激活 | 第94-96页 |
| 第六节 REG γ-linker结构与功能总结 | 第96-98页 |
| 第六章 REG γ-linker(K188E)突变体的晶体学研究 | 第98-113页 |
| 第一节 REG γ-linker(K188E)突变体的构建与原核表达 | 第98-102页 |
| ·REG γ-linker(K188E)突变体的克隆 | 第98-99页 |
| ·REG γ-linker(K188E)突变体原核表达与纯化 | 第99-101页 |
| ·REG γ-linker(K188E)突变体蛋白的晶体筛选与优化 | 第101-102页 |
| 第二节 REG γ-1inker(K188E)晶体的数据收集处理及结构解析 | 第102-107页 |
| ·REG γ-linker(K188E)晶体的数据收集处理 | 第102-103页 |
| ·REG γ-1inker(K188E)晶体的结构解析 | 第103页 |
| ·REG γ-linker(K188E)结构模型的评估 | 第103-107页 |
| 第三节 REG γ-linker(K188E)晶体的结构特征 | 第107-113页 |
| ·REG γ-1inker(K188E)的结构特征 | 第107-109页 |
| ·REG γ-1inker(K188E)与REG γ的结构比对 | 第109-113页 |
| 第七章 蛋白酶体的激活实验 | 第113-127页 |
| 第一节 G150突变体的功能研究 | 第113-117页 |
| ·REGγ150位甘氨酸突变体的功能研究 | 第113-114页 |
| ·REGα145位甘氨酸突变体的功能研究 | 第114-115页 |
| ·REG γ(K188E)150位甘氨酸突变体的功能研究 | 第115-117页 |
| 第二节 REG γ与原核PA26对蛋白酶体的不同激活机制 | 第117-123页 |
| ·低等原生动物系统中PA26对蛋白酶体的激活机制 | 第117-120页 |
| ·PEGα(D144A)/REGα(E143A)突变体激活蛋白酶体的研究 | 第120-121页 |
| ·REG γ(D149A)/REGγ(E148A)突变体激活蛋白酶体的研究 | 第121-122页 |
| ·REG γ(K188E/D149A)/REG γ(K188E/E148A)突变体激活蛋白酶体的研究 | 第122-123页 |
| 第三节 REG蛋白激活蛋白酶体酶活性的机制 | 第123-124页 |
| 第四节 REG γ(K188E)激活蛋白酶体酶活性的机制 | 第124-127页 |
| 第八章 结论 | 第127-130页 |
| 第一节 本论文研究成果 | 第127-128页 |
| 第二节 本论文特色与创新 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第139页 |
