| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 1 材料与方法 | 第12-31页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第12页 |
| ·试剂和主要试剂配制 | 第12-16页 |
| ·试剂 | 第12-13页 |
| ·主要试剂配制 | 第13-16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-18页 |
| ·L-Broth (LB) | 第16页 |
| ·黑曲霉种子培养基 | 第16页 |
| ·黑曲霉斜面培养基 | 第16页 |
| ·黑曲霉液体发酵培养基 | 第16-18页 |
| ·引物设计及合成 | 第18-19页 |
| ·木聚糖酶基因克隆和序列分析 | 第19-24页 |
| ·提取黑曲霉总RNA | 第19页 |
| ·提取黑曲霉基因组DNA | 第19-20页 |
| ·RT-PCR两步法扩增cDNA片段 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增基因组DNA片段 | 第21页 |
| ·电泳和胶回收 | 第21-22页 |
| ·PCR产物的TA克隆 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第23页 |
| ·重组子的筛选 | 第23-24页 |
| ·生物信息学分析及Genbank登录 | 第24页 |
| ·大肠杆菌中木聚糖酶的表达和纯化 | 第24-28页 |
| ·成熟肽cDNA的扩增 | 第24-25页 |
| ·表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·诱导产酶和粗酶液的提取方法 | 第26页 |
| ·蛋白质电泳(SDS-PAGE) | 第26-27页 |
| ·木聚糖酶的纯化 | 第27-28页 |
| ·标准曲线的绘制及相关计算公式 | 第28-30页 |
| ·木聚糖酶活力测定方法 | 第28页 |
| ·木糖标准曲线的绘制 | 第28-29页 |
| ·蛋白浓度的测定方法 | 第29页 |
| ·蛋白标准曲线的绘制 | 第29-30页 |
| ·酶活力及比酶活计算方法 | 第30页 |
| ·酶学性质的测定 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-61页 |
| ·木聚糖酶cDNA的扩增与克隆 | 第31-33页 |
| ·木聚糖酶DNA的扩增与克隆 | 第33-34页 |
| ·木聚糖酶cDNA片段的序列分析 | 第34-37页 |
| ·木聚糖酶DNA片段的序列分析 | 第37-38页 |
| ·黑曲霉XZ-3S木聚糖酶与其他物种木聚糖酶一级结构的同源性比较 | 第38-39页 |
| ·木聚糖酶系统进化树分析 | 第39-40页 |
| ·木聚糖酶二级结构分析及三维结构建模 | 第40-42页 |
| ·重组表达载体的构建及其鉴定 | 第42-43页 |
| ·木聚糖酶在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第43-45页 |
| ·重组菌发酵条件的优化 | 第45-54页 |
| ·重组大肠杆菌的生长曲线 | 第45页 |
| ·诱导剂浓度对产酶的影响 | 第45-47页 |
| ·诱导时机对产酶的影响 | 第47-48页 |
| ·诱导时间对产酶的影响 | 第48-50页 |
| ·诱导温度对产酶的影响 | 第50-51页 |
| ·交试验分析 | 第51-54页 |
| ·重组木聚糖酶酶学性质分析 | 第54-61页 |
| ·最适作用温度及温度稳定性 | 第54-57页 |
| ·最适pH及pH稳定性 | 第57-60页 |
| ·金属离子对重组酶活力的影响 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 4 结论 | 第63-64页 |
| 附图 | 第64-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 综述：木聚糖酶的研究进展及其应用 | 第75-87页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 附录 | 第87-88页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 个人简历 | 第90页 |