| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一部分 肺炎链球菌表面β-N-乙酰氨基己糖苷酶StrH的结构与功能研究 | 第13-63页 |
| 第一章 StrH研究背景 | 第13-29页 |
| ·引言 | 第13-29页 |
| ·肺炎链球菌的研究背景 | 第13-15页 |
| ·肺炎链球菌的毒力因子——表面糖苷酶 | 第15-23页 |
| ·肺炎链球菌表面β-N-乙酰氨基己糖苷酶 | 第23-26页 |
| ·GH20家族β-N-乙酰氨基己糖苷酶的催化机制可能的催化机制 | 第26-29页 |
| 第二章 StrH实验材料与方法 | 第29-35页 |
| ·StrH的质粒构建及蛋白表达 | 第29-31页 |
| ·StrH(35-977)-pLIM01和StrH(175-642)-p28质粒构建 | 第29-30页 |
| ·StrH(35-977)和StrH(175-642)重组蛋白的表达 | 第30-31页 |
| ·StrH(35-977)和StrH(175-642)重组蛋白质纯化 | 第31页 |
| ·晶体筛选与优化 | 第31-32页 |
| ·晶体衍射数据的收集与处理 | 第32页 |
| ·体外酶活检测 | 第32页 |
| ·1-Phenyl-3-methyl-5-pyrazolone(PMP)衍生化处理 | 第32页 |
| ·HPLC分析 | 第32页 |
| ·二级结构测定 | 第32-33页 |
| ·StrH与乳铁蛋白的酶联免疫吸附实验 | 第33-35页 |
| 第三章 StrH实验结果 | 第35-45页 |
| ·StrH(35-977)重组蛋白的纯化及结晶 | 第35-36页 |
| ·StrH(35-977)部分酶解 | 第36页 |
| ·StrH(175-642)亚克隆质粒的构建和重组蛋白的表达检测 | 第36-37页 |
| ·StrH(175-642)重组蛋白的纯化 | 第37-39页 |
| ·StrH(175-642)晶体初筛及优化 | 第39-40页 |
| ·StrH(175-642)衍射数据收集、处理及蛋白结构解析 | 第40-41页 |
| ·StrH体外活性测定 | 第41-42页 |
| ·二级结构测定 | 第42-43页 |
| ·StrH与乳铁蛋白的酶联免疫吸附实验结果 | 第43-45页 |
| 第四章 StrH分析与讨论 | 第45-61页 |
| ·StrH的结构域组成 | 第45-46页 |
| ·StrH(175-642)的整体结构 | 第46-49页 |
| ·StrH的GH20-1的活性位点 | 第49-51页 |
| ·StrH两个GH20结构域的活性分析 | 第51-52页 |
| ·StrH的底物特异性 | 第52-59页 |
| ·StrH的两个GH20结构域的协同效应研究 | 第59-61页 |
| 小结 | 第61-63页 |
| 第二部分 肺炎链球菌6-磷酸β-葡萄糖苷酶BglA-2的结构与功能研究 | 第63-97页 |
| 第五章 BglA-2研究背景 | 第63-73页 |
| ·肺炎链球菌的糖转运系统 | 第63-68页 |
| ·肺炎链球菌6-磷酸β-葡萄糖苷酶 | 第68-71页 |
| ·肺炎链球菌6-磷酸β-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第71-72页 |
| ·GH-1家族糖苷酶的研究进展 | 第72-73页 |
| 第六章 BglA-2实验材料与方法 | 第73-79页 |
| ·BglA-2的质粒构建 | 第73-74页 |
| ·BglA-2的表达及纯化 | 第74-75页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第74-75页 |
| ·重组蛋白质纯化 | 第75页 |
| ·晶体筛选与优化 | 第75页 |
| ·晶体衍射数据的收集与处理 | 第75页 |
| ·动态光散射测定 | 第75-76页 |
| ·体外酶活检测 | 第76页 |
| ·BglA-2对通用底物硝基苯6-磷酸β-D-葡萄糖的酶活测定 | 第76页 |
| ·1-Phenyl-3-methyl-5-pyrazolone(PMP)衍生化处理 | 第76页 |
| ·HPLC分析 | 第76页 |
| ·平衡解离常数Kd的测定 | 第76页 |
| ·二级结构测定 | 第76-77页 |
| ·基因敲除菌株的构建及生长曲线的测定 | 第77-79页 |
| ·基因敲除菌株的构建 | 第77页 |
| ·生长曲线的测定 | 第77-79页 |
| 第七章 BglA-2实验结果 | 第79-85页 |
| ·BglA-2构建及蛋白表达纯化 | 第79-80页 |
| ·BglA-2重组蛋白的晶体筛选和优化 | 第80-81页 |
| ·BglA-2的晶体数据收集及处理 | 第81-82页 |
| ·BglA-2酶活测定 | 第82-83页 |
| ·平衡解离常数Kd的测定 | 第83页 |
| ·二级结构测定 | 第83-84页 |
| ·生长曲线的测定 | 第84-85页 |
| 第八章 BglA-2实验分析与讨论 | 第85-95页 |
| ·BglA-2的整体结构 | 第85-86页 |
| ·BglA-2的活性位点 | 第86-87页 |
| ·BglA-2的底物特异性 | 第87-93页 |
| ·对subsite+1特异性的关键氨基酸 | 第88-91页 |
| ·对稳定磷酸根起关键作用的氨基酸 | 第91页 |
| ·一个色氨酸区分了GH-1家族里的6-磷酸β-葡萄糖苷酶和的6-磷酸β-半乳糖苷酶 | 第91-93页 |
| ·6-磷酸-β-糖苷酶提供了一个替代(非必须的)路径来利用β-连接的二糖 | 第93-95页 |
| 小结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-111页 |
| 附录 | 第111-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 在读期间发表的学术论文与参加的学术会议 | 第129页 |
