| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-24页 |
| ·马病毒性动脉炎简介 | 第16-18页 |
| ·病原学特征 | 第16-18页 |
| ·病毒形态学 | 第16页 |
| ·基因组结构特征及 ORFs 编码的蛋白质及其分子生物学功能 | 第16-18页 |
| ·EVA 的流行病学研究 | 第18页 |
| ·EVA 的诊断 | 第18-21页 |
| ·临诊症状 | 第19页 |
| ·病理变化 | 第19页 |
| ·EVA 的病原学诊断 | 第19-20页 |
| ·EAV 分离鉴定 | 第19页 |
| ·IFA 试验 | 第19页 |
| ·EAV 的分子生物学诊断技术 | 第19-20页 |
| ·EVA 的血清抗体诊断方法 | 第20-21页 |
| ·病毒中和试验（VN） | 第20页 |
| ·HA 和 HI 试验 | 第20页 |
| ·单抗阻断 ELISA (b-ELISA) | 第20页 |
| ·间接 ELISA | 第20-21页 |
| ·EAV 疫苗的研究 | 第21-22页 |
| ·灭活疫苗和弱毒疫苗 | 第21页 |
| ·EAV 亚单位疫苗的研究 | 第21页 |
| ·EAV 基因工程疫苗的研究 | 第21-22页 |
| ·马病毒性动脉炎的防治 | 第22页 |
| ·研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 EAV N 蛋白的表达及鉴定 | 第24-31页 |
| ·材料与方法 | 第24-25页 |
| ·病毒株、质粒、菌株及血清 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要溶液和主要常用培养基的配置 | 第24页 |
| ·可溶性蛋白纯化主要试剂的配方 | 第24页 |
| ·实验所需要仪器 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·EAV RNA 的提取与反转录 cDNA 的获得 | 第25页 |
| ·EAV N 基因的 PCR 扩增 | 第25页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第25页 |
| ·原核表达重组载体的构建与鉴定 | 第25-26页 |
| ·目的基因与载体的双酶切 | 第25-26页 |
| ·酶切产物的连接 | 第26页 |
| ·转化 | 第26页 |
| ·阳性单克隆的筛选与鉴定 | 第26页 |
| ·N 蛋白的原核表达与 SDS-PAGE 分析 | 第26-27页 |
| ·温度的选择 | 第27页 |
| ·诱导剂浓度的确定 | 第27页 |
| ·诱导时间的确定 | 第27页 |
| ·蛋白纯化 | 第27-28页 |
| ·Ni-NTA 柱的处理 | 第27页 |
| ·蛋白样品的处理 | 第27页 |
| ·蛋白样品的纯化 | 第27-28页 |
| ·重组 N 蛋白的免疫原性鉴定 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-30页 |
| ·N 基因扩增 | 第28页 |
| ·重组质粒 pET32a-N 的鉴定 | 第28-29页 |
| ·蛋白 SDS-PAGE 分析 | 第29页 |
| ·Western-blot 鉴定 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 EAV N 蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | 第31-39页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·病毒株、细胞与试验动物 | 第31页 |
| ·主要试剂、耗材 | 第31页 |
| ·仪器设备 | 第31页 |
| ·主要溶液的配制 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-34页 |
| ·动物免疫 | 第31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞筛选方法的建立 | 第31-32页 |
| ·小鼠巨噬细胞饲养层的准备 | 第32页 |
| ·细胞融合 | 第32-33页 |
| ·SP2/0 细胞的准备 | 第32页 |
| ·脾脏 B 淋巴细胞的制备 | 第32页 |
| ·融合具体步骤 | 第32-33页 |
| ·阳性细胞株的筛选 | 第33页 |
| ·融合细胞的换液 | 第33页 |
| ·阳性细胞集落的筛选与克隆化培养 | 第33页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第33页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备及其纯化 | 第33页 |
| ·单克隆抗体各种特性的鉴定 | 第33-34页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第33页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）鉴定 | 第33页 |
| ·单抗亚型鉴定 | 第33-34页 |
| ·单克隆抗体竞争活性的测定 | 第34页 |
| ·单抗隆抗体细胞上清和腹水效价的测定 | 第34页 |
| ·单抗相对亲和力测定 | 第34页 |
| ·实验结果 | 第34-38页 |
| ·阳性杂交瘤细胞筛选方法的建立 | 第34-35页 |
| ·融合后筛选获得的杂交瘤细胞株 | 第35页 |
| ·Western blot 鉴定结果 | 第35页 |
| ·IFA 鉴定结果 | 第35页 |
| ·单抗亚型鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·单抗竞争活性测定结果 | 第36页 |
| ·杂交瘤上清及腹水效价的测定 | 第36-37页 |
| ·腹水亲和力测定 | 第37-38页 |
| ·腹水的纯化 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 EAV N 蛋白 B 细胞抗原表位的鉴定 | 第39-48页 |
| ·材料与方法 | 第39-42页 |
| ·试验材料 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-42页 |
| ·引物合成 | 第39-40页 |
| ·抗原表位的初步鉴定 | 第40页 |
| ·抗原表位的精确定位 | 第40-42页 |
| ·表位抗原性分析 | 第42页 |
| ·抗原表位的保守性分析 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-46页 |
| ·抗原表位的初步鉴定 | 第42-43页 |
| ·抗原表位的精确定位 | 第43-45页 |
| ·表位抗原性分析 | 第45页 |
| ·抗原表位的保守性分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 固相竞争 ELISA 方法的初步建立及应用 | 第48-61页 |
| ·材料与方法 | 第48-51页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48页 |
| ·血清中和试验程序 | 第48页 |
| ·EAV 阳性血清的筛选 | 第48页 |
| ·固相竞争 ELISA 方法的建立 | 第48-51页 |
| ·固相竞争 ELISA 步骤 | 第49页 |
| ·最佳浓度的确定 | 第49页 |
| ·最佳作用条件的确定 | 第49-50页 |
| ·临界值的确定 | 第50页 |
| ·根据优化好的各个条件，确定最终的 c-ELISA 步骤 | 第50页 |
| ·特异性检测 | 第50页 |
| ·敏感性试验 | 第50页 |
| ·重复性试验 | 第50-51页 |
| ·与中和试验和进口试剂盒的符合率 | 第51页 |
| ·c-ELISA 方法的初步应用 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-59页 |
| ·阳性血清的选择 | 第51页 |
| ·工作浓度的确定 | 第51-53页 |
| ·最佳作用条件的确定 | 第53-56页 |
| ·本次试验所确定的 c-ELISA 反应程序 | 第56页 |
| ·特异性检测 | 第56-57页 |
| ·敏感性试验 | 第57页 |
| ·重复性试验结果 | 第57-58页 |
| ·批内重复试验结果 | 第57-58页 |
| ·批间重复试验结果 | 第58页 |
| ·与中和试验和进口试剂盒的符合率 | 第58页 |
| ·c-ELISA 的初步应用 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第六章 全文结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
