| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 第一章 腺苷通路诱导肾间质纤维化的形态学研究 | 第19-38页 |
| 1 材料和方法 | 第20-26页 |
| ·动物来源 | 第20页 |
| ·主要试剂与溶液配置 | 第20页 |
| ·免疫组织化学试剂 | 第20页 |
| ·主要溶液配置 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-23页 |
| ·动物模型制备及分组 | 第21页 |
| ·肾组织标本的处理流程 | 第21页 |
| ·HE染色步骤 | 第21-22页 |
| ·Masson's的三色染色流程 | 第22页 |
| ·免疫组织化学方法的运用和具体的实施步骤 | 第22-23页 |
| ·指标观察及定量分析 | 第23-24页 |
| ·小鼠肾小管损伤程度评分 | 第23-24页 |
| ·小鼠肾间质纤维化程度判断 | 第24页 |
| ·肾小管和肾间质PCNA阳性表达率 | 第24页 |
| ·肾组织缺氧程度的半定量化测定 | 第24页 |
| ·肾组织腺苷浓度的测定 | 第24-26页 |
| ·色谱条件 | 第25页 |
| ·腺嘌呤核苷酸的提取 | 第25页 |
| ·样品的测定和数据分析 | 第25-26页 |
| ·小鼠肾功能测定 | 第26页 |
| ·标本收集 | 第26页 |
| ·尿肌酐(UCr)、β_2微球蛋白(β_2-MG)含量,采用中南大学湘雅三医院检验科全自动生化分析仪一次性检测 | 第26页 |
| ·统计学处理 | 第26页 |
| 2 结果 | 第26-34页 |
| ·肾组织腺苷浓度的升高导致小鼠肾间质纤维化 | 第26-31页 |
| ·茶碱能减轻肾组织纤维化程度,对肾组织具有保护作用 | 第31-34页 |
| 3 讨论 | 第34-38页 |
| 第二章 腺苷通路导致肾间质纤维化的分子机制研究 | 第38-59页 |
| 1. 材料和方法 | 第38-45页 |
| ·材料 | 第38-40页 |
| ·动物来源 | 第38页 |
| ·主要的实验试剂 | 第38-39页 |
| ·主要溶液配置 | 第39页 |
| ·引物设计和合成处理 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-45页 |
| ·动物模型制备和分组 | 第40页 |
| ·肾组织总RNA抽提及鉴定 | 第40-41页 |
| ·对于基因组中DNA进行去除处理 | 第41页 |
| ·逆转录(RT)反应(20μl体系) | 第41页 |
| ·Real time PCR(25μl体系) | 第41-42页 |
| ·Real time PCR结果判断 | 第42页 |
| ·肾组织形态学的检测流程 | 第42-44页 |
| ·免疫组织化学方法及步骤 | 第44-45页 |
| ·TGF-β_1、α-SMA免疫组化定量分析 | 第45页 |
| ·统计学处理 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-55页 |
| ·促纤维化因子TGF-β_1、PAI-1、α_1(Ⅰ)procollagen mRNA在RIF小鼠肾组织中的动态变化以及不同浓度的ADO对该变化的影响 | 第45-51页 |
| ·TGF-β_1 mRNA在肾脏出现纤维化病变过程中的表达规律以及阻断ADO信号通路对TGF-β_1 mRNA的影响 | 第45-47页 |
| ·PAI-1 mRNA在肾脏出现纤维化病变过程中的表达规律以及阻断ADO信号通路对PAI-1 mRNA的影响 | 第47-49页 |
| ·a,(I)procollagen mRNA在肾脏出现纤维化病变过程中的表达规律以及阻断ADO信号通路对a 1 ( I ) procol lagen mRNA的影响 | 第49-51页 |
| ·各实验组TGF-β_1、α-SMA在肾组织中的表达及分布规律 | 第51-55页 |
| ·各实验组TGF-β_1在肾组织中的表达及分布规律 | 第51-53页 |
| ·各实验组α-SMA在肾组织中的表达及分布规律 | 第53-55页 |
| 3 讨论 | 第55-59页 |
| 第三章 腺苷通路对肾成纤维细胞生物学行为的影响 | 第59-85页 |
| 1 材料与方法 | 第59-66页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·细胞来源 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·方法与步骤 | 第60-65页 |
| ·PCR反应引物 | 第60-61页 |
| ·RNA提取步骤 | 第61-62页 |
| ·基因组DNA的去除步骤 | 第62页 |
| ·逆转录(20μl体系)反应 | 第62-63页 |
| ·Real-time PCR(25μl体系)实时荧光法 | 第63页 |
| ·Real-Time PCR(50μl体系)TaqMan探针法 | 第63页 |
| ·Real-time PCR扩增程序 | 第63-64页 |
| ·不同的药物对成纤维细胞的处理及分组 | 第64-65页 |
| ·MTT方法检测细胞毒性(生长曲线) | 第65页 |
| ·统计学处理 | 第65-66页 |
| 2 结果 | 第66-81页 |
| ·肾成纤维细胞表面腺苷受体的表达 | 第66-67页 |
| ·不同处理条件下肾成纤维细胞表达促纤维化因子TGF-β_1、α_1(Ⅰ)procollagenmRNA以及α-SMA mRNA的变化 | 第67-78页 |
| ·TGF-β_1 mRNA在不同药物干预下的表达规律 | 第67-70页 |
| ·α_1(Ⅰ)procollagen mRNA在不同药物干预下的表达规律 | 第70-74页 |
| ·α-SMA mRNA在不同药物干预下的表达规律 | 第74-78页 |
| ·不同干预条件对肾成纤维细胞增殖的影响 | 第78-81页 |
| 3 讨论 | 第81-85页 |
| 总结 | 第85-86页 |
| 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 综述 | 第93-113页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
