| 目录 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| ·国内外研究进展 | 第9-14页 |
| ·鸡球虫病概述及其防治现状 | 第9-10页 |
| ·Sir2 基因序列及蛋白结构特征 | 第10-12页 |
| ·Sir2 的功能 | 第12-13页 |
| ·Sir2 的催化机制 | 第13-14页 |
| ·研究目的及意义 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-46页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫 Sir2 基因的注释与克隆 | 第15-22页 |
| ·材料 | 第15-17页 |
| ·方法 | 第17-22页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫 EtSir2 的重组表达及 Western blot 分析 | 第22-37页 |
| ·材料 | 第22-27页 |
| ·方法 | 第27-37页 |
| ·EtSir2 酶动力学与抑制动力学分析 | 第37-46页 |
| ·材料 | 第37-39页 |
| ·方法 | 第39-46页 |
| 3 结果 | 第46-74页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫 EtSir2 基因的注释与克隆 | 第46-56页 |
| ·EtSir2 基因的注释 | 第46-47页 |
| ·PCR 扩增 EtSir2 全长 ORF 序列 | 第47页 |
| ·最适 PCR 反应条件 | 第47-48页 |
| ·PCR 产物的分离、回收和鉴定 | 第48-49页 |
| ·PCR 法鉴定转化克隆 | 第49页 |
| ·EtSir2 序列比对 | 第49-51页 |
| ·信号肽分析 | 第51-52页 |
| ·亚细胞定位的预测 | 第52-53页 |
| ·跨膜结构域分析 | 第53-54页 |
| ·多重序列比对及进化树分析 | 第54-56页 |
| ·模拟 3D 空间构象 | 第56页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫 EtSir2 的重组表达及 Western blot 分析 | 第56-65页 |
| ·PCR 扩增带酶切位点的 EtSir2 序列 | 第56-57页 |
| ·双酶切目的基因与载体 | 第57-58页 |
| ·PCR 法鉴定转化克隆 | 第58-59页 |
| ·双酶切鉴定 PCR 阳性克隆 | 第59-60页 |
| ·PCR 法鉴定重组表达质粒转化的表达菌 | 第60-61页 |
| ·不同诱导条件对 EtSir2 表达量的影响 | 第61-64页 |
| ·EtSir2 的 Ni-NTA 蛋白纯化 | 第64页 |
| ·凝胶色谱法分离 EtSir2 以及免疫印迹分析 | 第64-65页 |
| ·柔嫩艾美耳球虫 EtSir2 酶动力学分析 | 第65-74页 |
| ·BSA 标准曲线及检测结果 | 第65-66页 |
| ·荧光标准曲线 | 第66-67页 |
| ·最适酶量的确定 | 第67-69页 |
| ·最适反应条件 | 第69-70页 |
| ·Km 值和 Vmax | 第70-72页 |
| ·酶抑制动力学分析 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-79页 |
| ·最适 PCR 反应条件的确定 | 第74页 |
| ·生物信息学序列分析 | 第74-75页 |
| ·构建原核表达系统 | 第75-76页 |
| ·双酶切反应的摸索 | 第76页 |
| ·不同诱导条件对 EtSir2 表达量的影响 | 第76-77页 |
| ·蛋白纯化 | 第77页 |
| ·最适酶量的确定 | 第77-78页 |
| ·最适反应条件 | 第78页 |
| ·展望 | 第78-79页 |
| 5 结论 | 第79-80页 |
| ·EtSir2 基因序列信息 | 第79页 |
| ·EtSir2 蛋白表达与纯化 | 第79页 |
| ·酶动力学分析 | 第79页 |
| ·酶抑制动力学分析 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附图 | 第84页 |