| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略词(Abbreviations) | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-33页 |
| 1 课题的提出 | 第14-15页 |
| 2 植物硼营养研究进展 | 第15-25页 |
| ·硼的吸收和运输 | 第16-19页 |
| ·根对硼的吸收 | 第16-17页 |
| ·植物体内硼的移动性 | 第17-19页 |
| ·缺硼研究 | 第19-22页 |
| ·细胞壁、骨架和膜 | 第20-21页 |
| ·氮的固定和硝酸盐的同化作用 | 第21页 |
| ·次生代谢和氧化胁迫 | 第21-22页 |
| ·生长素运输 | 第22页 |
| ·硼毒害研究 | 第22-24页 |
| ·硼毒害与盐胁迫 | 第23-24页 |
| ·耐硼毒害机理 | 第24页 |
| ·硼素和基因表达 | 第24-25页 |
| 3 与硼运输有关的水通道蛋白研究进展 | 第25-29页 |
| ·水通道蛋白(MIP)的分类 | 第25页 |
| ·水通道蛋白的运输机制 | 第25-28页 |
| ·NIP蛋白的结构和功能 | 第28-29页 |
| 4 柑橘硼营养研究进展 | 第29-31页 |
| ·柑橘中硼的作用 | 第29页 |
| ·柑橘中硼的存在形式和移动性 | 第29-30页 |
| ·柑橘中硼素与钙、锌、盐的关系 | 第30-31页 |
| ·硼和钙 | 第30页 |
| ·硼和锌 | 第30-31页 |
| ·硼和盐 | 第31页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第31-33页 |
| 第二章 枳CiNIP5基因的克隆、表达及功能分析 | 第33-68页 |
| 1 材料与方法 | 第33页 |
| ·试验材料 | 第33页 |
| ·酶与试剂盒 | 第33页 |
| ·引物合成 | 第33页 |
| 2 实验方法 | 第33-48页 |
| ·试验材料的准备 | 第33-34页 |
| ·枳CiNIP5基因克隆 | 第34-39页 |
| ·植物总RNA的抽提 | 第34-35页 |
| ·RNA质量检测与浓度测定 | 第35页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第35页 |
| ·PCR扩增获得CiNIP5基因片段 | 第35-36页 |
| ·PCR产物的回收、纯化 | 第36-37页 |
| ·回收纯化的目的片段与克隆载体的连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第37-38页 |
| ·连接产物的转化及重组质粒的蓝白斑筛选 | 第38页 |
| ·CiNIP5基因片段测序 | 第38页 |
| ·序列拼接 | 第38页 |
| ·完整的ORF克隆 | 第38-39页 |
| ·生物信息学分析 | 第39页 |
| ·CiNIP5基因在缺硼胁迫下的表达模式分析 | 第39-40页 |
| ·枳CiNIP5基因超表达载体构建 | 第40-43页 |
| ·超量表达载体的构建 | 第40-42页 |
| ·小量法提取质粒DNA | 第42-43页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第43-45页 |
| ·根癌农杆菌感受态的制备 | 第43页 |
| ·工程菌的制备 | 第43-44页 |
| ·试剂和培养基配制 | 第44页 |
| ·根癌农杆菌介导的叶盘法转化烟草 | 第44-45页 |
| ·转基因烟抗性植株PCR检测 | 第45-46页 |
| ·转基因烟草基因组DNA提取方法 | 第45-46页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第46页 |
| ·亚细胞定位载体构建 | 第46页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因和野生型烟草叶片光合强度的测定 | 第46-47页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因和野生型烟草叶片相对电导率的测定 | 第47页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因和野生型烟草硼含量的测定 | 第47页 |
| ·T_1代转基因和野生型烟草的获得和筛选 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-64页 |
| ·CiNIP5基因的克隆及序列分析 | 第48-53页 |
| ·CiNIP5完整的ORF的克隆和分析 | 第48页 |
| ·CiNIP5和其他同源基因的聚类分析 | 第48-51页 |
| ·CiNIP5蛋白结构预测 | 第51-53页 |
| ·不同硼浓度处理柑橘砧木后CiNIP5的表达模式 | 第53-54页 |
| ·CiNIP5在枳壳中的表达模式 | 第53页 |
| ·缺硼胁迫下CiNIP5在砧木枳橙和香橙中的表达模式 | 第53-54页 |
| ·CiNIP5基因超表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·双酶切pMDNIP5和pCambia11301的结果 | 第55页 |
| ·T4连接酶连接pCAMBIA1301载体大片段和CiNIP5小片段 | 第55-56页 |
| ·pCambiall301：NIP5转化农杆菌 | 第56页 |
| ·烟草转基因植株的获得 | 第56-58页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草转化 | 第56-57页 |
| ·T_0代转基因烟草的PCR检测 | 第57-58页 |
| ·T_0代转基因烟草的半定量RT-PCR检测 | 第58页 |
| ·CiNIP5基因功能的验证 | 第58-63页 |
| ·T_0代转基因烟草与野生型烟草的表型差异 | 第58-59页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因烟草与野生型烟草的硼含量 | 第59-60页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因烟草与野生型烟草的膜透性 | 第60-61页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因烟草与野生型烟草的光合作用 | 第61-62页 |
| ·T_1代转基因烟草的获得和Km抗性筛选 | 第62-63页 |
| ·CiNIP5亚细胞定位 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-68页 |
| ·CiNIP5基因的克隆和序列分析 | 第64-65页 |
| ·CiNIP5基因的表达分析 | 第65页 |
| ·转化模式植物验证CiNIP5基因功能 | 第65-66页 |
| ·CiNIP5促进植株不定根的发生 | 第66-68页 |
| 第三章 枳NIP6基因的克隆和表达分析 | 第68-87页 |
| 1 材料与方法 | 第68-69页 |
| ·试验材料 | 第68-69页 |
| ·引物合成 | 第69页 |
| 2 实验方法 | 第69-73页 |
| ·试验材料的准备 | 第69页 |
| ·枳CiNIP6基因克隆 | 第69-70页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第69页 |
| ·PCR扩增获得CiNIP6基因片段 | 第69-70页 |
| ·CiNIP6 ORF在线预测 | 第70页 |
| ·生物信息学分析 | 第70页 |
| ·CiNIP6基因在缺硼胁迫下的表达模式 | 第70页 |
| ·枳叶脉石蜡切片的制作 | 第70-73页 |
| ·材料固定 | 第70-71页 |
| ·脱水 | 第71页 |
| ·透明 | 第71页 |
| ·浸蜡 | 第71-72页 |
| ·包埋 | 第72页 |
| ·切片、粘片和展片 | 第72页 |
| ·脱蜡与透明 | 第72页 |
| ·染色 | 第72页 |
| ·封片和烘片 | 第72-73页 |
| ·枳CiNIP6基因超表达载体构建 | 第73页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草遗传转化 | 第73页 |
| ·转基因烟草Km抗性植株PCR检测 | 第73页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因和野生型烟草叶片叶绿素含量测定 | 第73页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因和野生型烟草叶片相对电导率和含硼量的测定 | 第73页 |
| ·T1代转基因和野生型烟草的获得和筛选 | 第73页 |
| 3 结果与分析 | 第73-85页 |
| ·CiNIP6基因的克隆及序列分析 | 第73-74页 |
| ·CiNIP6和其他物种中NIP家族氨基酸序列比对和分析 | 第74-75页 |
| ·CiNIP6高级结构预测及亚细胞定位 | 第75-79页 |
| ·不同硼浓度处理枳壳后CiNIP6的表达模式 | 第79-80页 |
| ·正常条件下CiNIP6在枳壳中的表达模式 | 第79页 |
| ·硼胁迫条件下CiNIP6 mRNA在枳壳中表达模式 | 第79-80页 |
| ·缺硼条件下枳壳叶片结构变化 | 第80-81页 |
| ·CiNIP6基因超表达载体的构建 | 第81-82页 |
| ·烟草转基因植株的获得 | 第82-85页 |
| ·T_0代转基因烟草的PCR检测 | 第82页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因烟草与野生型烟草的膜透性 | 第82-83页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因烟草与野生型烟草的硼含量 | 第83-84页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因烟草与野生型烟草的光合作用 | 第84-85页 |
| ·缺硼处理后T_0代转基因烟草与野生型烟草的表型 | 第85页 |
| 4 讨论 | 第85-87页 |
| ·CiNIP6基因的克隆和序列分析 | 第85-86页 |
| ·CiNIP6基因的表达分析 | 第86页 |
| ·转化模式植物验证CiNIP6基因功能 | 第86-87页 |
| 第四章 枳NIP5 5'UTR序列分析、NIP5和NIP6启动子基因的克隆和生物信息学分析 | 第87-100页 |
| 1 材料与方法 | 第88-91页 |
| ·植物材料 | 第88页 |
| ·染色体步移实验方法 | 第88-91页 |
| ·染色体步移文库构建 | 第88-90页 |
| ·CiNIP5启动子扩增 | 第90-91页 |
| ·CiNIP6启动子的扩增 | 第91页 |
| ·生物信息学分析 | 第91页 |
| 2 结果与分析 | 第91-96页 |
| ·几种物种NIP5基因5'UTR间序列比对 | 第91-92页 |
| ·CiNIP5启动子序列生物信息学分析 | 第92-93页 |
| ·CiNIP6启动子序列生物信息学分析 | 第93-96页 |
| 3. 讨论 | 第96-100页 |
| ·CiNIP5 5'UTR与CiNIP5 mRNA的硼依赖性累积 | 第96页 |
| ·CiNIP5启动子顺式作用元件特征 | 第96-98页 |
| ·CiNIP6启动子顺式作用元件特征 | 第98页 |
| ·CiNIP5和CiNIP6启动子顺式作用元件对比 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 附录 | 第122页 |
