| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-50页 |
| 第一节 水稻条纹病毒研究进展 | 第16-24页 |
| ·水稻条纹叶枯病的发生概况 | 第16-17页 |
| ·水稻条纹病毒的生物学特性与进化地位 | 第17-19页 |
| ·水稻条纹病毒的分子生物学研究进展 | 第19-24页 |
| ·RdRP | 第19-20页 |
| ·NS2和NSvc2 | 第20-21页 |
| ·NS3和NCP | 第21-22页 |
| ·SP和NSvc4 | 第22-24页 |
| 第二节 RSV传播介体灰飞虱的生物学和传毒特性 | 第24-28页 |
| ·灰飞虱的形态特征 | 第24页 |
| ·灰飞虱的地理分布 | 第24-25页 |
| ·灰飞虱的周年生活史 | 第25页 |
| ·灰飞虱的获毒能力 | 第25-26页 |
| ·灰飞虱的传毒能力及其卵传规律 | 第26页 |
| ·灰飞虱与RSV的亲和性互作 | 第26-27页 |
| ·RSV对灰飞虱生活力的影响 | 第27-28页 |
| 第三节 植物病毒的昆虫介体传播机制研究进展 | 第28-40页 |
| ·非循回型植物病毒介体传播机制 | 第28-32页 |
| ·循回型植物病毒介体传播机制 | 第32-38页 |
| ·循回非增殖型植物病毒介体传播机制 | 第32-36页 |
| ·循回增殖型植物病毒介体传播机制 | 第36-38页 |
| ·存在的问题和展望 | 第38-40页 |
| 第四节 本研究的目的和意义 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-50页 |
| 第二部分 研究内容 | 第50-147页 |
| 第一章 水稻条纹病毒7个基因在水稻和灰飞虱体内表达量分析 | 第52-61页 |
| 摘要 | 第52页 |
| Abstract | 第52-53页 |
| ·材料与方法 | 第53-57页 |
| ·供试昆虫的筛选 | 第53-54页 |
| ·灰飞虱群体的筛选 | 第53-54页 |
| ·灰飞虱带毒率的检测 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·引物设计 | 第54-55页 |
| ·总RNA提取 | 第55-56页 |
| ·Real-time Q-PCR分析 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-59页 |
| ·RSV在水稻中的基因表达分析 | 第57-58页 |
| ·RSV基因在灰飞虱体内相对表达量分析 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第二章 灰飞虱体内RSV互作蛋白的筛选和功能验证 | 第61-95页 |
| 摘要 | 第61页 |
| Abstract | 第61-63页 |
| ·材料与方法 | 第63-80页 |
| ·供试昆虫 | 第63页 |
| ·菌株和载体 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·灰飞虱总蛋白的提取 | 第63-65页 |
| ·RSV粒子的提纯 | 第65页 |
| ·向电泳(2-DE)分离灰飞虱总蛋白 | 第65-68页 |
| ·灰飞虱总蛋白电泳前处理 | 第65-66页 |
| ·第一向等电聚焦 | 第66-67页 |
| ·胶条的平衡 | 第67页 |
| ·第二向SDS-PAGE电泳 | 第67-68页 |
| ·Western-blot和病毒覆盖检测(Virus overlay assay) | 第68-69页 |
| ·凝胶的半干转移 | 第68-69页 |
| ·病毒覆盖检测 | 第69页 |
| ·凝胶图像的匹配和分析 | 第69-70页 |
| ·蛋白质谱鉴定及数据检索 | 第70-71页 |
| ·RSV互作蛋白的基因克隆 | 第71-75页 |
| ·转录组数据库检索 | 第71页 |
| ·Rr-PCR | 第71-73页 |
| ·PCR产物的割胶纯化 | 第73页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第73页 |
| ·克隆载体的构建、转化和筛选 | 第73-75页 |
| ·酵母双杂交验证蛋白质互作 | 第75-78页 |
| ·酵母双杂交载体的构建 | 第75页 |
| ·酵母菌表型验证 | 第75-76页 |
| ·重组质粒的毒性与自激活作用检测 | 第76-77页 |
| ·酵母菌感受态细胞的制备 | 第77页 |
| ·重组质粒转化酵母菌AH109 | 第77-78页 |
| ·RSV互作蛋白的表达和体外病毒结合实验 | 第78-80页 |
| ·表达载体的构建 | 第78页 |
| ·RSV互作蛋白的原核表达 | 第78-79页 |
| ·表达蛋白的病毒结合实验(Far-Western blot) | 第79页 |
| ·表达蛋白的病毒结合实验(DIBA法) | 第79-80页 |
| ·结果与分析 | 第80-90页 |
| ·灰飞虱总蛋白的双向电泳分析 | 第80-81页 |
| ·灰飞虱蛋白与RSV粒子的结合 | 第81-82页 |
| ·病毒互作蛋白的鉴定 | 第82-86页 |
| ·RSV互作蛋白的基因克隆 | 第86-88页 |
| ·病毒互作蛋白与RSV-NCP酵母双杂交分析 | 第88-89页 |
| ·表达的病毒互作蛋白与RSV粒子的体外结合 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-95页 |
| 第三章 灰飞虱高带毒(RSV)群体酵母双杂交cDNA文库的构建及NCP互作因子的筛选 | 第95-119页 |
| 摘要 | 第95页 |
| Abstract | 第95-97页 |
| ·材料与方法 | 第97-108页 |
| ·供试昆虫 | 第97页 |
| ·菌株和载体 | 第97页 |
| ·主要试剂 | 第97页 |
| ·灰飞虱总RNA的提取 | 第97页 |
| ·mRNA的分离纯化 | 第97-98页 |
| ·cDNA的合成 | 第98-100页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第98页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第98-99页 |
| ·cDNA与重组接头连接 | 第99页 |
| ·cDNA分级分离及收集(柱层析法) | 第99-100页 |
| ·BP重组反应构建cDNA入门文库(Uncut型) | 第100-102页 |
| ·pGADT7载体的改造 | 第102页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第102-103页 |
| ·pGBKT7-NCP诱饵载体的构建以及毒性和自激活作用检测 | 第103页 |
| ·cDNA文库的扩增和滴度测定 | 第103-104页 |
| ·cDNA文库质粒的大量制备 | 第104页 |
| ·酵母双杂交筛选cDNA文库 | 第104-107页 |
| ·候选阳性克隆酵母质粒的提取 | 第107-108页 |
| ·候选阳性克隆cDNA插入片段的测序及分析 | 第108页 |
| ·结果与分析 | 第108-116页 |
| ·灰飞虱总RNA的提取及mRNA的分离纯化 | 第108页 |
| ·双链cDNA的合成及纯化 | 第108-109页 |
| ·cDNA入门文库的鉴定 | 第109-111页 |
| ·pGADT7载体的改造 | 第111页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库的鉴定 | 第111页 |
| ·诱饵载体的构建以及毒性和自激活作用检测 | 第111-112页 |
| ·cDNA文库的扩增 | 第112-113页 |
| ·酵母双杂交筛选NCP互作因子 | 第113-116页 |
| ·讨论 | 第116-119页 |
| 第四章 灰飞虱内生病毒HiPV与RSV传播相关性初探 | 第119-133页 |
| 摘要 | 第119页 |
| Abstract | 第119-120页 |
| ·材料与方法 | 第120-125页 |
| ·供试材料 | 第120-121页 |
| ·HiPV基因组结构分析 | 第121页 |
| ·HiPV-VP1的基因克隆、原核表达和抗体制备 | 第121-123页 |
| ·VP1的基因克隆 | 第121页 |
| ·VP1的原核表达 | 第121页 |
| ·表达产物的纯化 | 第121-122页 |
| ·抗体制备及效价测定 | 第122-123页 |
| ·灰飞虱体内VP1的检测 | 第123页 |
| ·单头灰飞虱HiPV检测方法的建立 | 第123-124页 |
| ·RT-PCR方法检测单头灰飞虱 | 第123-124页 |
| ·DIBA方法检测单头灰飞虱 | 第124页 |
| ·Western-blot方法检测单头灰飞虱 | 第124页 |
| ·灰飞虱群体的检测 | 第124页 |
| ·酵母双杂交分析HiPV主要的外壳蛋白与RSV-NCP互作关系 | 第124-125页 |
| ·结果与分析 | 第125-131页 |
| ·VP1的基因克隆、原核表达和抗体制备 | 第125-128页 |
| ·单头灰飞虱HiPV检测方法的建立及灰飞虱群体的检测 | 第128-130页 |
| ·酵母双杂交分析蛋白互作关系 | 第130-131页 |
| ·讨论 | 第131-133页 |
| 第五章 RSV编码的NSvc2蛋白的结构预测和验证 | 第133-141页 |
| 摘要 | 第133页 |
| Abstract | 第133-134页 |
| ·方法与结果 | 第134-139页 |
| ·NSvc2蛋白的生物信息学分析 | 第134-138页 |
| ·氨基酸序列比对 | 第134-135页 |
| ·信号肽预测 | 第135-136页 |
| ·糖基化预测 | 第136页 |
| ·跨膜结构域预测 | 第136页 |
| ·NSvc2蛋白拓扑结构预测 | 第136-138页 |
| ·NSvc2蛋白的检测 | 第138-139页 |
| ·讨论 | 第139-141页 |
| 参考文献 | 第141-147页 |
| 附录1 符号及缩写语的中英文对照 | 第147-149页 |
| 附录2 常用缓冲液及试剂配方 | 第149-155页 |
| 博士期间发表的文章 | 第155-156页 |
| 致谢 | 第156页 |
