| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| ·结核病及其现状分析 | 第11-13页 |
| ·结核病国内外现状 | 第11-12页 |
| ·结核分枝杆菌的耐药性 | 第12-13页 |
| ·结核分枝杆菌耐药性研究趋势 | 第13页 |
| ·结核分枝杆菌耐药的分子机制 | 第13-16页 |
| ·结核分枝杆菌耐药的分子机制 | 第13-14页 |
| ·结核分枝杆菌耐利福平的分子机制 | 第14页 |
| ·结核分枝杆菌耐异烟肼的分子机制 | 第14-16页 |
| ·结核分枝杆菌耐链霉素的分子机制 | 第16页 |
| ·结核分枝杆菌耐药性主要检测方法 | 第16-19页 |
| ·常规药敏试验方法 | 第16页 |
| ·BACTEC 液体培养基法 | 第16-17页 |
| ·噬菌体生物扩增法 | 第17页 |
| ·分子生物学快速检测方法 | 第17-19页 |
| ·荧光定量 PCR 技术及其在结核检测中的应用 | 第19-24页 |
| ·荧光定量 PCR 技术原理 | 第19-20页 |
| ·荧光定量 PCR 的荧光化学 | 第20-23页 |
| ·双链 DNA（dsDNA）结合荧光染料 | 第20页 |
| ·荧光标记探针 | 第20-23页 |
| ·实时荧光定量 PCR 技术在结核分枝杆菌研究中的应用 | 第23-24页 |
| ·结核分枝杆菌的检测 | 第23页 |
| ·耐药基因突变分析 | 第23-24页 |
| ·本论文的研究意义及技术路线 | 第24-26页 |
| ·本论文的研究意义 | 第24-25页 |
| ·本论文的技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 野生型及突变型质粒的构建 | 第26-38页 |
| ·实验材料 | 第27-30页 |
| ·质粒和菌株 | 第27页 |
| ·主要药品与试剂 | 第27-28页 |
| ·主要设备与仪器 | 第28页 |
| ·溶液配制 | 第28-30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·扩增引物设计 | 第30页 |
| ·基因组的提取 | 第30页 |
| ·目的基因扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第31-32页 |
| ·TA 载体的连接 | 第32页 |
| ·感受态的制备 | 第32-33页 |
| ·转化与单克隆的培养 | 第33页 |
| ·菌液 PCR | 第33-34页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒的定量 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-37页 |
| ·重组质粒菌落 PCR 结果 | 第35-36页 |
| ·重组质粒测序鉴定结果 | 第36页 |
| ·重组质粒定量结果 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第三章 三重荧光定量 PCR 体系的构建 | 第38-47页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·质粒 | 第38页 |
| ·主要药品与试剂 | 第38页 |
| ·主要设备与仪器 | 第38-39页 |
| ·溶液配制 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·荧光 PCR 引物和探针的设计 | 第39-40页 |
| ·常规三重 PCR 体系条件探索 | 第40-41页 |
| ·单重荧光 PCR 检测引物特异性 | 第41页 |
| ·多重荧光定量 PCR 体系探索 | 第41-43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-45页 |
| ·温度梯度 PCR 结果 | 第43-44页 |
| ·各扩增产物熔解曲线 | 第44页 |
| ·三重荧光定量 PCR 结果 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第四章 标准曲线的建立 | 第47-54页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·质粒 | 第47页 |
| ·主要药品与试剂 | 第47页 |
| ·主要设备与仪器 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-49页 |
| ·准确性验证 | 第48页 |
| ·灵敏性验证 | 第48页 |
| ·重复性验证 | 第48页 |
| ·标准曲线的建立 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-52页 |
| ·准确性结果 | 第49页 |
| ·灵敏度结果 | 第49-51页 |
| ·重复性结果 | 第51-52页 |
| ·标准曲线 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 结论与展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附件 | 第67页 |