目录 | 第1-7页 |
摘要 | 第7-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
缩略语词汇表 | 第11-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-27页 |
1. 植物类受体蛋白激酶研究进展 | 第13-19页 |
·类受体蛋白激酶结构特征、分类及功能 | 第13-18页 |
·类受体蛋白激酶关键区域在信号传导中的作用 | 第18-19页 |
2. 水稻抗白叶枯病菌(Xoo)类受体蛋白激酶XA21 | 第19-20页 |
·Xa21发现及克隆 | 第19-20页 |
·Xa21编码的蛋白激酶生化特性 | 第20页 |
3. 病原物引起的植物超敏反应(HR) | 第20-23页 |
·HR反应中的细胞死亡是一种程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD) | 第21页 |
·HR反应特征表现 | 第21-23页 |
4. 类受体蛋白激酶配体筛选的研究策略 | 第23-25页 |
5. 本研究目的与意义 | 第25-27页 |
第二章 水稻OsRPK1-Xa21融合基因构建 | 第27-47页 |
摘要 | 第27页 |
1. 材料与方法 | 第27-39页 |
·材料 | 第27-28页 |
·OsRPK1和XA21生物信息学分析 | 第28页 |
·OsRPK1-Xa21融合基因构建策略 | 第28-30页 |
·水稻根尖总RNA提取 | 第30页 |
·RNA质量鉴定与完整性电泳检测 | 第30-31页 |
·cDNA第一链合成 | 第31页 |
·各目的片段的PCR扩增 | 第31-33页 |
·PCR产物的纯化与回收 | 第33-34页 |
·Overlap PCR扩增融合基因 | 第34-36页 |
·Overlap PCR产物的纯化与回收 | 第36页 |
·目的片段与T载体的连接 | 第36页 |
·超级感受态细胞的制作与重组质粒的转化 | 第36-37页 |
·重组质粒的鉴定 | 第37-39页 |
2. 结果与分析 | 第39-44页 |
·OsRPK1和XA21生物信息学分析 | 第39-41页 |
·电泳检测RNA质量及纯度鉴定 | 第41页 |
·各目的片段的PCR扩增结果 | 第41-42页 |
·Overlap PCR扩增融合基因 | 第42页 |
·菌液PCR | 第42-43页 |
·双酶切验证 | 第43页 |
·DNA序列的测定 | 第43-44页 |
3. 小结 | 第44页 |
4. 讨论 | 第44-47页 |
第三章 带有融合基因的植物表达载体的构建、遗传转化及悬浮细胞的建立 | 第47-65页 |
摘要 | 第47页 |
1. 材料与方法 | 第47-57页 |
·供试材料 | 第47-48页 |
·pBI21重组表达载体的构建 | 第48-51页 |
·重组表达载体转化农杆菌感受态细胞 | 第51-53页 |
·农杆菌EHA105介导的水稻遗传转化 | 第53-55页 |
·水稻悬浮细胞的建立 | 第55页 |
·转基因水稻悬浮细胞的检测 | 第55-57页 |
2. 结果与分析 | 第57-61页 |
·pBI21重组表达载体的构建 | 第57-58页 |
·重组表达载体转化农杆菌感受态细胞 | 第58页 |
·农杆菌EHA105介导的水稻遗传转化 | 第58-59页 |
·水稻悬浮细胞的建立 | 第59-61页 |
·转基因水稻悬浮细胞的PCR检测 | 第61页 |
3. 小结 | 第61-62页 |
4. 讨论 | 第62-65页 |
·农杆菌介导的遗传转化 | 第62-63页 |
·悬浮细胞系的建立 | 第63-65页 |
第四章 2,4-D作为类受体蛋白激酶OsRPK1配体的验证 | 第65-85页 |
摘要 | 第65页 |
1. 材料与方法 | 第65-72页 |
·供试材料 | 第65-66页 |
·Xoo侵染转Xa21明恢63悬浮细胞引发HR反应 | 第66-70页 |
·OsRPK1配体的筛选 | 第70-72页 |
2. 结果与分析 | 第72-82页 |
·转Xa21明恢63悬浮细胞的HR反应测定 | 第72-76页 |
·OsRPK1配体的筛选 | 第76-82页 |
3. 小结 | 第82页 |
4. 讨论 | 第82-85页 |
全文结论 | 第85-89页 |
1. 研究小结 | 第85-86页 |
·融合基因OsRPKl-LRR+TM+JM/Xa21-KD和OsRPK1-LRR+TM/Xa21-JM+KD的Overlap PCR扩增 | 第85页 |
·植物表达载体的构建、遗传转化及悬浮细胞AN19和B912的建立 | 第85页 |
·2,4-D作为类受体蛋白激酶OsRPK1配体的验证 | 第85-86页 |
2. 创新之处 | 第86页 |
3. 存在的问题与展望 | 第86-89页 |
·试验存在的问题 | 第86页 |
·展望 | 第86-89页 |
参考文献 | 第89-97页 |
附录Ⅰ | 第97-104页 |
附录Ⅱ | 第104-115页 |
致谢 | 第115页 |