| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 1. 引言 | 第13-28页 |
| ·杨树炭疽病 | 第13-14页 |
| ·杨树炭疽病的病原及分类地位 | 第13-14页 |
| ·杨树炭疽病的症状 | 第14页 |
| ·植物病原真菌的遗传转化系统 | 第14-22页 |
| ·适用于丝状真菌的选择标记 | 第14-15页 |
| ·转化载体 | 第15页 |
| ·报告基因 | 第15-17页 |
| ·常见的病原真菌转化方法 | 第17-19页 |
| ·遗传转化方法在真菌功能基因组学中的应用 | 第19-22页 |
| ·植物病原真菌的侵染过程和致病基因的功能研究 | 第22-27页 |
| ·植物病原真菌的侵染策略 | 第22-23页 |
| ·侵染过程的细胞学研究 | 第23-24页 |
| ·致病基因的鉴定和功能研究方法 | 第24-25页 |
| ·致病基因的种类 | 第25-26页 |
| ·炭疽菌侵染过程及致病基因的功能研究 | 第26-27页 |
| ·研究目的和意义 | 第27-28页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第28页 |
| 2. 材料和方法 | 第28-44页 |
| ·实验菌株与质粒 | 第28-31页 |
| ·主要试剂、溶液和培养基 | 第31页 |
| ·杨树炭疽病菌PEG介导的原生质体遗传转化 | 第31-32页 |
| ·杨树炭疽病菌对潮霉素B的敏感性测定 | 第31页 |
| ·杨树炭疽病菌原生质体的制备 | 第31页 |
| ·杨树炭疽病菌原生质体的转化 | 第31-32页 |
| ·潮霉素抗性菌株的获得及其PCR验证 | 第32页 |
| ·GFP表达菌株的获得和观察 | 第32-34页 |
| ·GFP表达质粒的提取 | 第32页 |
| ·PEG介导的原生质体遗传转化 | 第32-33页 |
| ·GFP转化子的遗传稳定性检测 | 第33页 |
| ·转化子GFP荧光的观察 | 第33页 |
| ·GFP表达菌株侵染杨树的显微观察 | 第33-34页 |
| ·双启动子基因沉默载体的构建和制备 | 第34-38页 |
| ·构建方法 | 第34-36页 |
| ·载体构建元件的扩增 | 第36-37页 |
| ·重组质粒提取 | 第37页 |
| ·pSD-SUR1沉默骨架载体的制备 | 第37-38页 |
| ·dsRNA介导的GFP基因沉默 | 第38-41页 |
| ·GFP沉默载体的构建 | 第38-39页 |
| ·杨树炭疽病菌对氯嘧磺隆的敏感性测定 | 第39页 |
| ·PEG原生质体遗传转化 | 第39页 |
| ·GFP沉默突变菌株RNA提取 | 第39页 |
| ·GFP沉默突变体的实时荧光定量RT-PCR鉴定 | 第39-41页 |
| ·GFP沉默突变体GFP拷贝数分析 | 第41页 |
| ·GFP沉默突变体的荧光观察 | 第41页 |
| ·杨树炭疽菌dsRNA介导的GFP沉默比例统计 | 第41页 |
| ·CgMEK1的沉默及表型分析 | 第41-44页 |
| ·CgMEK1的序列分析 | 第41页 |
| ·pSD-SUR-Mek1沉默载体的构建 | 第41-42页 |
| ·PEG原生质体遗传转化 | 第42页 |
| ·CgMEK1沉默的验证 | 第42页 |
| ·CgMEK1沉默突变体的表型分析 | 第42-43页 |
| ·CgMEK1沉默突变体的培养性状检测 | 第43-44页 |
| 3. 结果 | 第44-69页 |
| ·杨树炭疽病菌PEG介导的原生质体遗传转化体系 | 第44-46页 |
| ·杨树炭疽菌对潮霉素B的敏感性 | 第44-45页 |
| ·杨树炭疽病菌原生质体的制备及转化 | 第45页 |
| ·杨树炭疽病菌阳性转化于的鉴定 | 第45-46页 |
| ·GFP表达菌株的获得和观察 | 第46-50页 |
| ·GFP转专化子的获得和筛选 | 第46-47页 |
| ·GFP转化子的鉴定 | 第47页 |
| ·GFP转化子的遗传稳定性分析 | 第47页 |
| ·杨树炭疽病菌GFP转化子的荧光观察 | 第47-48页 |
| ·GFP表达菌株侵染杨树的显微观察 | 第48-50页 |
| ·GFP沉默载体的构建 | 第50-56页 |
| ·载体质粒的酶切 | 第50-51页 |
| ·载体构建元件的扩增 | 第51-52页 |
| ·pSD-SUR1沉默骨架载体的获得 | 第52-54页 |
| ·pSD-SUR-GFP沉默载体的构建 | 第54-56页 |
| ·杨树炭疽病菌GFP表达基因的沉默 | 第56-63页 |
| ·杨树炭疽病菌对氯嘧磺隆的敏感性 | 第56页 |
| ·杨树炭疽病菌GFP沉默突变体的获得及筛选 | 第56-57页 |
| ·杨树炭疽病菌GFP沉默突变体的gDNA和总RNA的提取 | 第57页 |
| ·杨树炭疽病菌GFP基因沉默突变体的PCR鉴定 | 第57-58页 |
| ·GFP基因沉默突变体的定量分析 | 第58-59页 |
| ·GFP沉默突变体的GFP拷贝数分析 | 第59-60页 |
| ·杨树炭疽病菌GFP沉默子的荧光观察 | 第60-63页 |
| ·杨树炭疽菌dsRNA介导的GFP沉默效率分析 | 第63页 |
| ·MEK1沉默载体的构建 | 第63-65页 |
| ·杨树炭疽病菌CgMEK1的沉默和功能分析 | 第65-69页 |
| ·CgMEK1沉默突变体的获得及总RNA的提取 | 第65页 |
| ·MEK1基因沉默突变体的定量分析 | 第65页 |
| ·附着胞和致病性测定 | 第65-67页 |
| ·培养性状分析 | 第67-69页 |
| 4. 结论 | 第69页 |
| 5. 讨论 | 第69-75页 |
| ·PEG介导的原生质体遗传转化的影响因素 | 第69-70页 |
| ·GFP报告基因的优势及应用前景 | 第70-71页 |
| ·杨树炭疽菌dsRNA介导的基因沉默 | 第71-73页 |
| ·杨树炭疽菌功能基因组研究策略 | 第73-75页 |
| 附表1 主要试剂和培养基 | 第75-78页 |
| 附表2 引物 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 个人简介 | 第87-88页 |
| 导师简介 | 第88-89页 |
| 获得成果目录 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |