| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 缩略词表 | 第12-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-34页 |
| ·生物冶金概述 | 第18-20页 |
| ·浸矿微生物 | 第18-19页 |
| ·环境中的金属离子对浸矿微生物的影响 | 第19页 |
| ·浸矿微生物对环境中的金属离子的抗性机制 | 第19-20页 |
| ·重金属的抗性机制研究进展 | 第20-25页 |
| ·重金属解毒机制 | 第20-23页 |
| ·重金属抗性基因 | 第23-24页 |
| ·重金属转录调控因子研究概况 | 第24-25页 |
| ·硫酸盐同化对重金属抗性的贡献 | 第25-31页 |
| ·硫酸盐同化途径的关键酶 | 第27-29页 |
| ·硫酸盐同化途径的调控 | 第29页 |
| ·丝氨酸乙酰转移酶研究概况 | 第29-31页 |
| ·论文研究的目的意义 | 第31-32页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第32-33页 |
| ·论文创新性 | 第33页 |
| ·论文课题来源 | 第33-34页 |
| 第二章 浸矿微生物重金属抗性机制初探 | 第34-50页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·材料与方法 | 第35-40页 |
| ·菌种 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·浸矿微生物生长情况的测定方法 | 第35-36页 |
| ·菌体的培养 | 第36页 |
| ·粗蛋白的提取 | 第36页 |
| ·亚细胞结构中重金属离子含量的测定 | 第36-37页 |
| ·硫酸根(SO_4~(2-))浓度的测定 | 第37页 |
| ·半胱氨酸(Cys)含量的测定 | 第37-38页 |
| ·谷胱甘肽(GSH)含量的测定 | 第38-39页 |
| ·硫酸盐同化途径相关酶类活性的测定 | 第39-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-49页 |
| ·Cd~(2+)对菌体生长的影响情况 | 第40页 |
| ·Cd~(2+)在细菌的亚细胞结构中的分布 | 第40-41页 |
| ·Cd~(2+)对菌体内谷胱甘肽(GSH)含量的影响 | 第41-43页 |
| ·Cd~(2+)对菌体内硫酸根含量的影响 | 第43页 |
| ·Cd~(2+)对菌体内硫酸盐同化途径相关酶类活性的影响 | 第43-44页 |
| ·Zn~(2+)对菌体生长的影响情况 | 第44-45页 |
| ·Zn~(2+)对A.ferrooxidans细胞内Cys、GSH含量的影响 | 第45-46页 |
| ·Zn~(2+)对菌体内硫酸盐同化途径相关酶类活性的影响 | 第46-47页 |
| ·Pb~(2+)对菌体生长的影响情况 | 第47-48页 |
| ·Pb~(2+)对A.ferrooxidans细胞内Cys、GSH含量的影响 | 第48页 |
| ·Pb~(2+)对菌体内硫酸盐同化途径相关酶类活性的影响 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第三章 浸矿微生物重金属抗性基因的表达差异分析 | 第50-71页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·重金属抗性基因的选取 | 第50-51页 |
| ·材料和方法 | 第51-57页 |
| ·试剂与仪器 | 第51-52页 |
| ·RNA的提取及纯化 | 第52-53页 |
| ·反转录cDNA合成 | 第53-54页 |
| ·制备反转录和非反转录样品 | 第54页 |
| ·引物设计 | 第54-56页 |
| ·内参基因的选择 | 第56页 |
| ·引物检测 | 第56页 |
| ·标准品制备 | 第56页 |
| ·Real-time PCR检测 | 第56-57页 |
| ·Real-time PCR检测结果的分析 | 第57页 |
| ·重金属抗性基因的生物信息学分析 | 第57-58页 |
| ·序列同源性比对 | 第57页 |
| ·蛋白质基本数据的计算 | 第57-58页 |
| ·亚细胞结构定位 | 第58页 |
| ·信号肽(Signal Peptide)预测 | 第58页 |
| ·跨膜结构域分析 | 第58页 |
| ·保守区域预测 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-70页 |
| ·总RNA质量分析 | 第58-59页 |
| ·cDNA质量分析 | 第59-60页 |
| ·引物质量评估 | 第60页 |
| ·标准曲线和熔解曲线分析 | 第60页 |
| ·重金属抗性基因的生物信息学分析 | 第60-64页 |
| ·不同浓度Cd~(2+)刺激下重金属抗性基因的差异表达 | 第64-67页 |
| ·Cd~(2+)胁迫下重金属抗性机制的模型的预测 | 第67-68页 |
| ·不同浓度Zn~(2+)刺激下重金属抗性基因的差异表达 | 第68-69页 |
| ·不同浓度Pb~(2+)刺激下重金属抗性基因的差异表达 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第四章 重金属胁迫下硫酸盐同化途径相关基因的表达差异分析 | 第71-88页 |
| ·引言 | 第71-72页 |
| ·实验材料与方法 | 第72-74页 |
| ·菌种 | 第72页 |
| ·培养基 | 第72页 |
| ·工具酶及其他试剂 | 第72-73页 |
| ·SDS-PAGE电泳的试剂配置 | 第73页 |
| ·蛋白亲和纯化试剂的配置 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-80页 |
| ·基因组的提取 | 第74页 |
| ·目的基因克隆 | 第74-77页 |
| ·目的蛋白的表达纯化 | 第77-78页 |
| ·用SDS-PAGE验证已纯化的目的蛋白 | 第78-79页 |
| ·硫酸盐同化途径的相关酶的活性分析 | 第79页 |
| ·基因的差异表达分析 | 第79-80页 |
| ·结果与讨论 | 第80-87页 |
| ·硫酸盐同化基本代谢路径的分析 | 第80-82页 |
| ·硫酸盐同化代谢途径的确定 | 第82-83页 |
| ·Real-time PCR检测分析 | 第83-84页 |
| ·不同浓度Cd~(2+)肋迫下硫酸盐同化相关基因的差异表达 | 第84-85页 |
| ·不同浓度Pb~(2+)胁迫下硫酸盐同化相关基因的差异表达 | 第85-86页 |
| ·不同浓度Pb~(2+)胁迫下硫酸盐同化相关基因的差异表达 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 第五章 浸矿微生物重金属抗性关键基因的过表达分析 | 第88-99页 |
| ·引言 | 第88页 |
| ·实验材料与方法 | 第88-89页 |
| ·培养基 | 第88页 |
| ·质粒的酶切反应体系 | 第88-89页 |
| ·Cys测定试剂 | 第89页 |
| ·GSH测定试剂 | 第89页 |
| ·实验方法 | 第89-90页 |
| ·pCysE和pCmtR重组质粒的提取 | 第89页 |
| ·pCysE和pCmtR蛋白的验证 | 第89页 |
| ·重金属刺激菌体的诱导表达 | 第89-90页 |
| ·菌体吸光度OD_(600)的测定 | 第90页 |
| ·Cys含量的测定 | 第90页 |
| ·GSH含量的测定 | 第90页 |
| ·细胞内重金属的含量测定 | 第90页 |
| ·实验结果及讨论 | 第90-97页 |
| ·p CmtR-BL21、pCysE-BL21重组菌体的验证 | 第90-91页 |
| ·不同浓度Cd~(2+)的刺激下菌体相关指标的测定结果 | 第91-94页 |
| ·不同浓度Zn~(2+)的刺激下菌体相关指标的测定结果 | 第94-96页 |
| ·不同浓度Pb~(2+)的刺激下菌体相关指标的测定结果 | 第96-97页 |
| ·小结 | 第97-99页 |
| 第六章 重金属浸出及其浸出过程中种群优势度的分析 | 第99-116页 |
| ·引言 | 第99页 |
| ·实验材料与方法 | 第99-105页 |
| ·菌种 | 第99页 |
| ·培养基 | 第99页 |
| ·样品的采样与化学参数测定 | 第99-100页 |
| ·样品的预处理 | 第100页 |
| ·菌落多样性的分析方法 | 第100-103页 |
| ·RFLP分析与统计分析 | 第103-104页 |
| ·系统发育树的建立 | 第104页 |
| ·浸矿方法 | 第104页 |
| ·重金属浸出率的分析 | 第104-105页 |
| ·结果与讨论 | 第105-114页 |
| ·采样点的化学参数测定分析 | 第105页 |
| ·AMD样品菌落多样性的分析 | 第105-110页 |
| ·重金属的浸出率分析 | 第110-114页 |
| ·小结 | 第114-116页 |
| 第七章 结论与展望 | 第116-119页 |
| ·全文总结 | 第116-118页 |
| ·问题不足及研究展望 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-132页 |
| 博士期间发表论文、申请专利及获奖情况 | 第132-134页 |
| 致谢 | 第134页 |
