| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 縮略词表 | 第10-11页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-38页 |
| ·生物冶金概述 | 第15页 |
| ·嗜酸氧化亚铁硫杆菌能量代谢介绍 | 第15-21页 |
| ·嗜酸氧化亚铁硫杆菌简介 | 第15-16页 |
| ·嗜酸氧化亚铁硫杆菌基因组信息 | 第16-18页 |
| ·嗜酸氧化亚铁硫杆菌铁氧化系统介绍 | 第18-19页 |
| ·嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫氧化系统介绍 | 第19-21页 |
| ·铁硫簇生物合成 | 第21-36页 |
| ·铁硫簇的结构 | 第22-23页 |
| ·铁硫簇的功能 | 第23-24页 |
| ·铁硫簇的系统组成 | 第24-30页 |
| ·铁硫簇的生物合成机理 | 第30-34页 |
| ·ISC铁硫簇传递机理 | 第34-35页 |
| ·ISC铁硫簇生物合成的调节机制 | 第35-36页 |
| ·论文研究目的及意义 | 第36-37页 |
| ·论文研究的主要内容 | 第37页 |
| ·论文课题来源 | 第37-38页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第38-53页 |
| ·实验材料 | 第38-41页 |
| ·菌种与载体 | 第38-39页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第39页 |
| ·其它试剂 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-41页 |
| ·实验方法 | 第41-51页 |
| ·细菌的培养 | 第41-42页 |
| ·基因组的提取 | 第42页 |
| ·基因组DNA凝胶纯化 | 第42-43页 |
| ·PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·PCR产物及载体pET28b的酶切 | 第44页 |
| ·载体和目的片段连接反应 | 第44页 |
| ·转化 | 第44-45页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第45-46页 |
| ·蛋白质的条件表达 | 第46-47页 |
| ·蛋白的纯化 | 第47页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第47-50页 |
| ·Western blotting | 第50-51页 |
| ·测试分析方法 | 第51-53页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第51页 |
| ·紫外分光光度计(UV Scanning) | 第51页 |
| ·电子顺磁共振(EPR) | 第51页 |
| ·Bradford法测定蛋白质浓度 | 第51-52页 |
| ·蛋白样品中铁含量和无机硫含量的测定 | 第52-53页 |
| 第三章 嗜酸氧化亚铁硫杆菌IscU的克隆表达及性质鉴定 | 第53-69页 |
| ·引言 | 第53-54页 |
| ·材料与方法 | 第54-57页 |
| ·细菌的培养 | 第54页 |
| ·pET28b-IscU表达载体的构建 | 第54页 |
| ·IscU蛋白的表达 | 第54-55页 |
| ·IscU蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| ·IscU蛋白结合铁的能力的测定 | 第56-57页 |
| ·IscU上铁硫簇组装的测定 | 第57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-67页 |
| ·细菌的培养 | 第57-58页 |
| ·IscU基因的克隆与表达载体的构建 | 第58页 |
| ·IscU蛋白的表达 | 第58-60页 |
| ·IscU蛋白的纯化 | 第60-61页 |
| ·IscU蛋白结构的模拟 | 第61-63页 |
| ·IscU蛋白铁结合能力的研究 | 第63-64页 |
| ·IscU蛋白铁硫簇组装的研究 | 第64-67页 |
| ·本章小结 | 第67-69页 |
| 第四章 嗜酸氧化亚铁硫杆菌IscS的克隆表达及性质鉴定 | 第69-83页 |
| ·引言 | 第69页 |
| ·材料与方法 | 第69-72页 |
| ·pET28b-IscS表达载体的构建 | 第69-70页 |
| ·IscS蛋白的表达与纯化 | 第70-71页 |
| ·IscS蛋白半胱氨酸脱硫酶活性的测定 | 第71页 |
| ·不同pH和温度条件对IscS半胱氨酸脱硫酶活性的影响 | 第71页 |
| ·IscS对铁硫簇组装作用的研究 | 第71-72页 |
| ·IscS蛋白结合铁及铁硫复合物的能力的测定 | 第72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-82页 |
| ·IscS基因的克隆与表达载体的构建 | 第72-73页 |
| ·IscS蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第73-74页 |
| ·IscS蛋白结构的模拟 | 第74-76页 |
| ·IscS半胱氨酸脱硫酶活性的检测 | 第76-78页 |
| ·IscS参与铁硫簇的生物组装 | 第78-81页 |
| ·IscS蛋白结合铁及铁硫复合物的能力 | 第81-82页 |
| ·本章小结 | 第82-83页 |
| 第五章 嗜酸氧化亚铁硫杆菌IscA的克隆表达及性质鉴定 | 第83-103页 |
| ·引言 | 第83页 |
| ·材料与方法 | 第83-86页 |
| ·pET28b-IscA表达载体的构建 | 第83-84页 |
| ·IscA蛋白的表达与纯化 | 第84-85页 |
| ·不同形式的IscA蛋白的制备 | 第85页 |
| ·IscA蛋白铁结合能力的测定 | 第85页 |
| ·不同形式的IscA蛋白之间的转换 | 第85页 |
| ·A.ferrooxidans IscA对E.coli体内铁硫簇合成的替代作用 | 第85-86页 |
| ·IscA蛋白参与IscU上铁硫簇的生物合成 | 第86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-101页 |
| ·IscA基因的克隆与表达载体的构建 | 第86-87页 |
| ·IscA蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第87-88页 |
| ·IscA蛋白结构的模拟 | 第88-90页 |
| ·IscA铁结合能力的测定 | 第90-95页 |
| ·IscA对大肠杆菌体内铁硫簇合成的替代作用 | 第95-97页 |
| ·不同形式的IscA蛋白之间的转换 | 第97-100页 |
| ·IscA作为铁供体参与IscU上铁硫簇的生物组装 | 第100-101页 |
| ·本章小结 | 第101-103页 |
| 第六章 嗜酸氧化亚铁硫杆菌铁硫簇组装及其传递机理研究 | 第103-120页 |
| ·引言 | 第103-104页 |
| ·材料与方法 | 第104-106页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第104页 |
| ·低铁离子浓度下IscU上铁硫簇的生物组装 | 第104页 |
| ·L-半胱氨酸在铁硫簇生物合成中的作用 | 第104-105页 |
| ·ISC铁硫簇系统中IscA和IscU上铁硫簇合成的竞争机制 | 第105页 |
| ·铁硫簇中支架蛋白和apo-形式铁硫蛋白之间的传递机制 | 第105-106页 |
| ·结果与讨论 | 第106-118页 |
| ·在低铁离子条件下IscU上铁硫簇的生物组装 | 第106-109页 |
| ·L-半胱氨酸可以修饰IscA中铁的结合中心 | 第109-110页 |
| ·Iron-loaded IscA为铁硫簇在支架蛋白IscU上的组装提供铁 | 第110-112页 |
| ·IscU是ISC操纵子中优先被选择的支架蛋白 | 第112-115页 |
| ·IscA是ISC操纵子中优先被选择的铁结合蛋白 | 第115-116页 |
| ·铁硫簇在IscA和apo-形式铁硫蛋白之间的传递 | 第116-118页 |
| ·本章小结 | 第118-120页 |
| 第七章 嗜酸氧化亚铁硫杆菌ATP硫酸化酶的表达、纯化及性质研究 | 第120-134页 |
| ·引言 | 第120页 |
| ·材料与方法 | 第120-123页 |
| ·pET28b-CysD1表达载体的构建 | 第120-121页 |
| ·CysD1蛋白的表达与纯化 | 第121-122页 |
| ·CysD1突变体蛋白的构建 | 第122-123页 |
| ·重组ATPS的酶活测定 | 第123页 |
| ·结果与讨论 | 第123-133页 |
| ·ATPS基因的克隆与表达载体的构建 | 第123-124页 |
| ·CysD1蛋白的表达与纯化 | 第124-125页 |
| ·CysD1的ATPS酶活性分析 | 第125-127页 |
| ·CysD1蛋白结构的模拟 | 第127-129页 |
| ·CysD1 ATP硫酸化酶结合关键位点 | 第129-133页 |
| ·本章小结 | 第133-134页 |
| 第八章 总结与展望 | 第134-138页 |
| ·全文总结 | 第134-136页 |
| ·研究展望 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-150页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第150-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
