| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·迟純爱德华氏菌 | 第11-14页 |
| ·迟钝爱德华氏菌概述 | 第11-12页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的致病性 | 第12-14页 |
| ·鱼类免疫系统概述 | 第14-15页 |
| ·鱼用疫苗的种类及发展 | 第15-16页 |
| ·灭活疫苗 | 第15-16页 |
| ·减毒活疫苗 | 第16页 |
| ·亚单位疫苗 | 第16页 |
| ·DNA疫苗 | 第16页 |
| ·细菌载体疫苗及其优化方法 | 第16-21页 |
| ·细菌载体疫苗的应用 | 第16-17页 |
| ·体内诱导表达启动子的应用 | 第17-18页 |
| ·提高抗原表达的稳定性的策略 | 第18-19页 |
| ·增加质粒稳定性 | 第19页 |
| ·平衡致死系统 | 第19-21页 |
| ·本论文的主要内容和意义 | 第21-22页 |
| 第2章 迟钝爱德华氏菌asd缺失突变株的构建 | 第22-39页 |
| ·引言 | 第22-24页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第24-25页 |
| ·药品与试剂 | 第25-26页 |
| ·主要培养基及试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·主要技术服务及软件 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·细菌培养及保藏 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的钙转化 | 第28页 |
| ·细菌质粒和基因组提取 | 第28页 |
| ·迟钝爱德华氏菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·迟钝爱德华氏菌的电转化 | 第29页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| ·DNA产物纯化及DNA电泳胶回收 | 第29页 |
| ·PCR方法 | 第29-30页 |
| ·菌落PCR | 第30页 |
| ·缺失株筛选流程 | 第30-32页 |
| ·asdB回补株构建 | 第32页 |
| ·缺失株扫描电镜观察 | 第32-33页 |
| ·实验结果以及讨论 | 第33-38页 |
| ·突变菌株构建基因型验证结果 | 第33-34页 |
| ·asd缺失株突变株表型测定 | 第34-37页 |
| ·回补株生长曲线测定 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第3章 减毒迟钝爱德华氏菌无抗表达系统的构建及优化 | 第39-54页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39-43页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第39-41页 |
| ·药品与试剂 | 第41-42页 |
| ·常规培养基以及试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·细菌培养及保藏 | 第43页 |
| ·细胞密度测定 | 第43页 |
| ·常规分子克隆 | 第43页 |
| ·WEDΔasdB基因缺失株构建以及回补株生长曲线测定 | 第43页 |
| ·E.coliΔasd感受态制备 | 第43页 |
| ·无抗质粒二联吡啶诱导标GFP表达量测定 | 第43页 |
| ·无抗质粒稳定性测定 | 第43-44页 |
| ·回补株的LD_(50)测定 | 第44页 |
| ·斑马鱼饲养 | 第44页 |
| ·重组减毒株感染成年斑马鱼 | 第44-45页 |
| ·斑马鱼样品处理 | 第45页 |
| ·使用SDS-PAGE检测蛋白 | 第45页 |
| ·使用Western-blotting法检测GFP蛋白 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-53页 |
| ·WEDΔasdB突变株构建以及表型测定 | 第46-47页 |
| ·WEDΔasdB无抗回补质粒构建以及优化 | 第47-48页 |
| ·无抗回补疫苗株生长曲线测定 | 第48-50页 |
| ·回补株的LD_(50)测定 | 第50页 |
| ·GFP表达株的构建及其表达量测定 | 第50-51页 |
| ·pUTta4体外传代稳定性的测定 | 第51-52页 |
| ·无抗质粒体内表达稳定性分析 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第4章 E.trada多效价载体疫苗构建以及动物体内疫苗效果评价 | 第54-60页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第54-55页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·常规培养基 | 第55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-56页 |
| ·细菌培养及保藏 | 第55页 |
| ·常规分子克隆 | 第55页 |
| ·多效价疫苗载体构建 | 第55页 |
| ·大菱鲆饲养 | 第55页 |
| ·疫苗株在大菱鲆上免疫效果的测定 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-59页 |
| ·gapA34抗原蛋白克隆以及无抗载体疫苗构建 | 第56页 |
| ·E.tarda感染大菱鲆病症 | 第56-57页 |
| ·在大菱鲆上评价多效价载体疫苗的保护力 | 第57-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第5章 结论与展望 | 第60-63页 |
| ·总结 | 第60-61页 |
| ·展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
