| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一部分 引言 | 第9-21页 |
| 一. 乳腺癌的转移 | 第9-10页 |
| 二. 支架蛋白家族NEDD9 与癌细胞的转移 | 第10-13页 |
| （一） NEDD9 的结构和位置 | 第11页 |
| （二） NEDD9 与细胞粘附、迁移和浸润的关系 | 第11-12页 |
| （三） NEDD9 的研究现状 | 第12-13页 |
| 三. MAPK通路的调节机制 | 第13-16页 |
| （一） MAPKS信号通路的组成及其活化特点 | 第13-15页 |
| （二） MAPK信号通路激活的生物学意义 | 第15-16页 |
| 四. 基质金属蛋白酶与癌细胞浸润和迁移 | 第16-19页 |
| （一） 基质金属蛋白酶结构及种类 | 第16-17页 |
| （二） 基质蛋白酶的作用机制 | 第17-19页 |
| 五. 本文研究的内容和意义 | 第19-21页 |
| （一） 立题依据 | 第19-20页 |
| （二） 本文研究的内容和意义 | 第20-21页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第21-42页 |
| 一. 实验材料 | 第21-25页 |
| （一） 质粒 | 第21-25页 |
| （二） 抗体 | 第25页 |
| （三） 哺乳动物细胞系 | 第25页 |
| （四） 试剂 | 第25页 |
| 二. 实验仪器 | 第25-26页 |
| 三、 实验方法 | 第26-42页 |
| Ⅰ. 分子生物学试验方法 | 第26-33页 |
| （一） 分子克隆 | 第26页 |
| （二） DNA 的琼脂糖电泳 | 第26页 |
| （三） 质粒大量制备的方法 | 第26-28页 |
| （四） 哺乳动物细胞总RNA 的提取和反转录 | 第28-29页 |
| （五） 逆转录（Reverse Transcription， RT） | 第29-30页 |
| （六） PCR 反应 | 第30-31页 |
| （七） RNA 干涉（RNAi） | 第31-33页 |
| Ⅱ 细胞生物学实验方法 | 第33-42页 |
| （一） 哺乳动物细胞系的培养 | 第33页 |
| （二） 真核生物细胞的瞬时转染和荧光素酶报告基因检测 | 第33-35页 |
| （三） 电转染 | 第35页 |
| （四） 蛋白质的Western blot 分析 | 第35-37页 |
| （五） 体外细胞划痕 | 第37-38页 |
| （六） 体外细胞迁移分析 | 第38页 |
| （七） 体外细胞浸润分析 | 第38-39页 |
| （八） 明胶酶谱分析 | 第39-42页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第42-52页 |
| 一. NEDD9 表达质粒MCF-10A稳定转染细胞系的筛选 | 第42页 |
| 二. NEDD9 促进MCF-10A细胞发生EMT | 第42-45页 |
| 1. NEDD9 表达质粒稳定转染MCF-10A细胞的形态和相关蛋白含量变化 | 第42-44页 |
| 2. NEDD9 表达质粒稳定转染MCF-10A细胞的浸润和迁移能力上升 | 第44-45页 |
| 三. NEDD9 表达质粒稳定转染MCF-10A细胞后MMP9 表达量上调 | 第45-47页 |
| 1. NEDD9 表达质粒稳定转染MCF-10A细胞能够引起MMP9 转录水平上调 | 第45-46页 |
| 2. 外源过表达NEDD9 能够引起MMP9 和MMP2 蛋白水平的上调 | 第46页 |
| 3. 明胶酶谱实验证明过表达NEDD9 上调MMP9 的表达 | 第46-47页 |
| 四. NEDD9 通过上调MMP9 进而促进MCF-10A的浸润和迁移能力的上调 | 第47-49页 |
| 1. 构建 MMP9 干涉质粒 | 第47-48页 |
| 2. 用MMP9 干涉质粒转染稳定转染NEDD9 表达质粒的MCF-10A细胞系，细胞的浸润和迁移能力明显下调 | 第48-49页 |
| 五. NEDD9 通过P38途径上调MMP9 基因的表达 | 第49-52页 |
| 1. 稳定转染NEDD9 表达质粒的MCF-10A细胞中，MAPK信号通路中相关蛋白的磷酸化水平上升 | 第49页 |
| 2. 抑制MAPK信号通路后，NEDD9 稳定转染细胞MCF-10A浸润和迁移能力下调 | 第49-50页 |
| 3. 抑制p38 途径后，MMP9 表达量的下调 | 第50-52页 |
| 第四部分 讨论 | 第52-54页 |
| 一. NEDD9 促进乳腺癌的迁移和浸润 | 第52页 |
| 二. NEDD9 能促进金属蛋白酶MMP9 的表达 | 第52-53页 |
| 三. NEDD9 通过P38途径上调MMP-9的表达 | 第53-54页 |
| 第五部分 主要结论和创新点 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 在校期间公开发表论文及著作情况 | 第63页 |
