| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| ·猪链球菌2型研究进展 | 第11-20页 |
| ·猪链球菌2型概述 | 第12页 |
| ·猪链球菌2型致病机制研究进展 | 第12-15页 |
| ·SS2的定植及其在血液中的散播 | 第13-15页 |
| ·差异表达基因的研究方法 | 第15-20页 |
| ·mRNA差异显示技术(mRNADD) | 第15-16页 |
| ·抑制性消减杂交技术(SSH) | 第16-17页 |
| ·基因表达系列分析技术(serial analysis of gene express,SAGE) | 第17-18页 |
| ·生物芯片技术(Biochip) | 第18-20页 |
| 2 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 3 试验材料及方法 | 第21-41页 |
| ·试验材料 | 第21-24页 |
| ·菌种 | 第21-22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·细胞系 | 第22页 |
| ·主要试剂及药品 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·培养基及缓冲液配制 | 第24页 |
| ·试验流程及方法 | 第24-41页 |
| ·猪链球菌2型的培养 | 第24页 |
| ·猪链球菌2型计数 | 第24-25页 |
| ·仔猪人工感染实验 | 第25页 |
| ·组织样采集和细菌血清型鉴定 | 第25-26页 |
| ·RNA提取和芯片杂交 | 第26-31页 |
| ·RNA提取 | 第26页 |
| ·RNA纯化 | 第26-27页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第27页 |
| ·cDNA第二链合成 | 第27-28页 |
| ·双链cDNA纯化 | 第28页 |
| ·生物素标记cRNA | 第28-29页 |
| ·cRNA纯化 | 第29页 |
| ·cRNA片段化 | 第29-30页 |
| ·芯片杂交 | 第30页 |
| ·芯片清洗染色、扫描 | 第30-31页 |
| ·差异表达基因的聚类分析 | 第31页 |
| ·荧光定量基因PCR对芯片数据检验 | 第31-34页 |
| ·荧光定量PCR基本原理 | 第32页 |
| ·RNA提取 | 第32页 |
| ·cDNA合成 | 第32-33页 |
| ·引物的设计合成 | 第33页 |
| ·cDNAPCR扩增鉴定和RNA样品中DNA检测 | 第33-34页 |
| ·荧光定量反应 | 第34页 |
| ·差异表达基因功能分析 | 第34页 |
| ·差异表达基因在细胞水平中的荧光定量分析 | 第34-36页 |
| ·细菌培养 | 第34页 |
| ·猪肺上皮细胞(JSPLC)培养 | 第34-35页 |
| ·细菌与细胞的相互作用 | 第35页 |
| ·RNA提取 | 第35页 |
| ·cDNA合成 | 第35-36页 |
| ·引物的设计与合成 | 第36页 |
| ·DNA去除 | 第36页 |
| ·差异表达基因在细胞水平的荧光定量分析 | 第36页 |
| ·差异表达基因真核表达载体的构建 | 第36-41页 |
| ·引物设计与合成 | 第36-37页 |
| ·目的基因扩增 | 第37页 |
| ·PCR产物回收及纯化 | 第37-38页 |
| ·目的基因TA克隆 | 第38页 |
| ·感受态制备 | 第38页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第38页 |
| ·质粒的小量制备 | 第38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·真核质粒pcDNA3.1—ODC和pcDNA3.1—P38的构建 | 第38-41页 |
| 4 试验结果与分析 | 第41-52页 |
| ·仔猪发病症状 | 第41页 |
| ·组织样品采集和分离菌的鉴定 | 第41页 |
| ·RNA质量检测及芯片杂交 | 第41-43页 |
| ·芯片杂交结果 | 第43-44页 |
| ·差异表达基因的聚类分析 | 第44-45页 |
| ·芯片结果的荧光定量PCR验证 | 第45-46页 |
| ·差异表达基因的功能分析 | 第46-50页 |
| ·差异表达基因GO和pathway分析 | 第46-48页 |
| ·差异表达基因分析 | 第48-50页 |
| ·差异表达基因在细胞水平的荧光定量分析 | 第50页 |
| ·ODC和P38真核表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 5 讨论 | 第52-54页 |
| 6 全文小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 致谢 | 第65页 |