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百脉根PIN1基因在共生互作中的功能研究

中文摘要第1-10页
Abstract第10-12页
1 前言第12-29页
   ·生长素在植物生长发育中的研究进展第12-17页
   ·PIN 做为生长素的输出载体参与了植物生长发育过程第17-22页
     ·PIN 参与了胚胎形成过程第17-18页
     ·PIN 参与了胚后期根和芽的发育第18页
     ·PIN 参与了根的生长发育过程第18-19页
     ·PIN 参与了茎的发育过程第19-20页
     ·PIN 参与了维管组织的发育过程第20-21页
     ·PIN 参与了植物的向性运动第21-22页
   ·根瘤形成过程第22页
   ·激素对根瘤发育的调节第22-24页
   ·生长素变化与共生过程之间相互作用第24-27页
     ·响应生长素的变化第25页
     ·根瘤的形成依赖宿于主植物的生长素的运输第25-26页
     ·在根瘤起始过程中生长素输入载体和输出载体是如何被调节的第26-27页
   ·生长素的输出载体 PIN 与共生结瘤之间的关系第27页
   ·本实验的目的意义第27-29页
2 材料与方法第29-40页
   ·材料与方法第29-31页
     ·植物材料第29-30页
       ·百脉根种植和生长条件第29页
       ·百脉根种子的灭菌处理第29-30页
     ·培养基及营养液(配方见附录):第30页
     ·酶与各种生化试剂第30页
     ·引物第30-31页
   ·实验方法第31-40页
     ·百脉根植物基因组的提取与纯化第31页
       ·百脉根植物基因组的提取第31页
       ·百脉根植物基因组的纯化第31页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)第31-33页
     ·载体构建第33-35页
       ·PCR 扩增第33页
       ·连接反应第33-34页
       ·酶切和回收第34页
       ·百脉根超表达 PIN1 表达载体的构建第34-35页
       ·启动子驱动 GUS 报告基因表达载体的构建第35页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第35页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第35页
       ·大肠杆菌细胞的转化第35页
     ·大肠杆菌中质粒的提取第35-36页
     ·农杆菌感受态细胞的制备和转化第36页
       ·发根农杆菌感受态细胞的制备第36页
     ·百脉根根瘤菌接种第36页
     ·百脉根固氮酶活的测定第36-37页
     ·发根农杆菌介导的百脉根发根根系转化第37页
     ·GUS 检测第37-38页
     ·百脉根生长素及生长素极性运输抑制剂的处理第38页
     ·百脉根 RNA 的提取纯化与反转录第38-40页
       ·TRIZOL 法提取百脉根 RNA第38页
       ·百脉根 RNA 的纯化第38页
       ·百脉根 RNA 中基因组 DNA 的去除第38-39页
       ·百脉根 RNA 的反转录第39-40页
3 结果与分析第40-55页
   ·百脉根中 PIN1 基因的克隆第40-41页
     ·百脉根总 RNA 的提取与反转录第40页
     ·PIN1 基因的克隆第40-41页
   ·百脉根中 PIN1 基因的 cDNA 序列及编码的氨基酸信息第41-42页
     ·PIN1 基因的 cDNA 全长序列及编码的氨基酸信息第41页
     ·百脉根中 PIN1 基因与其它植物中同源基因的亲缘关系比对第41-42页
   ·百脉根中 PIN1 启动子的扩增第42页
     ·百脉根总 DNA 的提取以及 PIN1 启动子的克隆第42页
   ·百脉根杂合子的鉴定第42-43页
   ·uml 突变体的结瘤表型分析第43-47页
     ·uml 突变体的筛选第43-44页
     ·uml 突变体的共生结瘤表型分析第44-46页
     ·uml 突变体接种植株固氮酶活力的测定第46-47页
   ·uml 中 PIN1 时空表达模式的分析第47-49页
     ·PIN1 启动子在百脉根中根系中空间表达模式第47-48页
     ·不同接种时间根系和根瘤中 PIN1 的表达第48-49页
   ·生长素以及生长素极性运输抑制剂对 uml 结瘤的影响第49-51页
   ·过表达 PIN1 能够使突变体 uml 恢复结瘤表型第51-53页
     ·含有 PIN1 过表达载体的转化第52-53页
   ·在根瘤形成过程中生长素分布的变化第53-55页
4 讨论第55-59页
5 结论第59-60页
参考文献第60-73页
致谢第73页

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