| 目录 | 第1-8页 |
| TABLE OF CONTENTS | 第8-12页 |
| 摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-19页 |
| 符号说明及縮写词 | 第19-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第22-43页 |
| ·粘细菌简介 | 第22-28页 |
| ·粘细菌的分类及特征 | 第22-24页 |
| ·粘球菌的多细胞群体行为 | 第24-25页 |
| ·纤维堆囊菌及其次级代谢产物 | 第25-28页 |
| ·微生物三酰基甘油酯类内含物研究进展 | 第28-41页 |
| ·细菌内含物简介 | 第28-30页 |
| ·三酰基甘油酯(TAG)的功能 | 第30-31页 |
| ·TAG的生物合成与降解 | 第31-33页 |
| ·粘细菌三酰基甘油酯(TAG)的研究进展 | 第33-34页 |
| ·微生物脂肪酶概述 | 第34-36页 |
| ·微生物脂肪酶的分类 | 第36-38页 |
| ·微生物脂肪酶的结构 | 第38-40页 |
| ·微生物脂肪酶的应用 | 第40-41页 |
| ·本论文工作开展思路和研究内容 | 第41-43页 |
| 第二章 粘细菌脂类TAG合成及降解关键酶基因的分析 | 第43-48页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·基因组序列信息 | 第43页 |
| ·数据库及分析软件 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·S. cellulosum So ce56 TAG合成及降解酶分析 | 第44页 |
| ·S. cellulosum So0157-2 TAG合成及降解酶分析 | 第44-45页 |
| ·M.xanthus DK1622 TAG合成及降解酶分析 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 纤维堆囊菌So0157-2脂肪酶LipA、LipB的基因克隆、表达和性质研究 | 第48-92页 |
| ·实验材料和仪器试剂 | 第49-54页 |
| ·菌株和质粒 | 第49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| ·实验试剂 | 第50-53页 |
| ·常规溶液的配制 | 第50-52页 |
| ·普通试剂的购置 | 第52-53页 |
| ·各种试剂盒 | 第53页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第53-54页 |
| ·生物信息学分析网站及软件 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-73页 |
| ·lipA与lipB基因以及编码蛋白的生物信息学分析 | 第54-55页 |
| ·纤维堆囊菌菌体培养 | 第55页 |
| ·异源表达载体的构建 | 第55-65页 |
| ·目的片段的克隆及后处理 | 第55-59页 |
| ·质粒载体的酶切及连接转化 | 第59-61页 |
| ·表达载体构建流程图 | 第61-65页 |
| ·目的蛋白的表达纯化 | 第65-69页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第65-66页 |
| ·目的蛋白的检测 | 第66-67页 |
| ·表达条件的优化 | 第67页 |
| ·表达蛋白的提取 | 第67-68页 |
| ·Ni柱亲和层析纯化目的蛋白 | 第68页 |
| ·变性包涵体蛋白的复性 | 第68-69页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第69页 |
| ·重组蛋白(r-LipA)酶学性质分析 | 第69-72页 |
| ·pNP标准曲线的制作 | 第70页 |
| ·r-LipA的最适温度及温度稳定性测定 | 第70-71页 |
| ·r-LipA的最适pH及pH稳定性测定 | 第71页 |
| ·金属离子及去垢剂对r-LipA活性的影响 | 第71页 |
| ·r-LipA的有机溶剂耐受性测定 | 第71页 |
| ·r-LipA的底物特异性测定 | 第71-72页 |
| ·r-LipA的酶学动力学测定 | 第72页 |
| ·重组蛋白(r-LipB)酶学性质分析 | 第72-73页 |
| ·实验结果与讨论 | 第73-91页 |
| ·适冷脂肪酶基因lipA性质研究 | 第73-83页 |
| ·适冷脂肪酶基因lipA的生物信息学分析 | 第73-74页 |
| ·表达载体的构建 | 第74-75页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第75-76页 |
| ·适冷脂肪酶r-LipA酶学性质分析 | 第76-83页 |
| ·脂肪酶基因lipB性质研究 | 第83-91页 |
| ·脂肪酶基因lipB的生物信息学分析 | 第83-85页 |
| ·表达载体的构建 | 第85-86页 |
| ·目的蛋白的表达与纯化 | 第86-90页 |
| ·脂肪酶r-LipB酶学性质分析 | 第90-91页 |
| ·本章小结 | 第91-92页 |
| 第四章 粘细菌DK1622、So0157-2脂类合成及降解酶基因的敲除及功能初步探究 | 第92-128页 |
| ·实验材料和仪器试剂 | 第93-95页 |
| ·菌株和质粒 | 第93-94页 |
| ·培养基 | 第94页 |
| ·实验试剂 | 第94-95页 |
| ·常规溶液的配制 | 第94-95页 |
| ·普通试剂的购置 | 第95页 |
| ·各种试剂盒 | 第95页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第95页 |
| ·生物信息学分析网站及软件 | 第95页 |
| ·实验方法 | 第95-109页 |
| ·生物信息学分析预测 | 第95-96页 |
| ·目的基因敲除质粒载体的构建 | 第96-101页 |
| ·DK1622中敲除质粒载体的构建 | 第96-98页 |
| ·So0157-2中敲除质粒载体的构建 | 第98-101页 |
| ·黄色粘球菌DK1622的电转化及突变株的筛选纯化 | 第101-103页 |
| ·黄色粘球菌DK1622的电转化 | 第101-102页 |
| ·DK1622基因缺失突变株的筛选及纯化 | 第102-103页 |
| ·DK1622目的基因缺失突变株的性质分析 | 第103-106页 |
| ·菌体细胞和内含物形态光镜观察 | 第103页 |
| ·菌株生长能力的分析 | 第103-104页 |
| ·菌株运动能力的分析 | 第104页 |
| ·菌株胞外多糖(EPS)产生能力的分析 | 第104-105页 |
| ·菌株子实体发育及生孢能力分析 | 第105-106页 |
| ·纤维堆囊菌与大肠杆菌间的接合转移 | 第106-109页 |
| ·带构建质粒的大肠杆菌的获得 | 第106页 |
| ·带接合辅助质粒的大肠杆菌的获得 | 第106页 |
| ·双质粒(构建质粒与辅助质粒)的大肠杆菌的获得 | 第106-107页 |
| ·接合转移所需大肠杆菌的准备 | 第107页 |
| ·接合转移所需纤维堆囊菌的准备 | 第107-108页 |
| ·堆囊菌和大肠杆菌的接合 | 第108页 |
| ·筛选接合子 | 第108-109页 |
| ·纤维堆囊菌接合子PCR验证 | 第109页 |
| ·实验结果与讨论 | 第109-126页 |
| ·DK1622中脂类合成及降解酶基因的敲除及功能的初步探索 | 第109-121页 |
| ·脂类TAG合成及降解酶预测基因信息的获得 | 第109-110页 |
| ·基因缺失突变株的获得 | 第110-114页 |
| ·目的基因缺失突变株的性质分析 | 第114-121页 |
| ·So0157-2中脂类合成及降解酶基因的敲除 | 第121-126页 |
| ·预测基因信息的获得 | 第121页 |
| ·同源重组突变纤维堆囊菌的获得 | 第121-126页 |
| ·本章小结 | 第126-128页 |
| 总结与展望 | 第128-130页 |
| 附录 | 第130-138页 |
| 参考文献 | 第138-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第145-146页 |
| 附件 | 第146页 |
