胆固醇氧化酶的菌种筛选、鉴定及酶的分离纯化与性质研究
| 第一部分 综述 | 第1-30页 |
| 1.胆固醇的生理功能 | 第8-10页 |
| 2.胆固醇氧化酶的研究进展 | 第10-23页 |
| ·胆固醇氧化酶的来源及性质 | 第10-13页 |
| ·胆固醇氧化酶的催化机制及检测方法 | 第13-14页 |
| ·胆固醇氧化酶的结构 | 第14-15页 |
| ·胆固醇氧化酶的制备方法 | 第15-17页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第16页 |
| ·离子交换层析 | 第16页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第16页 |
| ·超滤 | 第16-17页 |
| ·亲和层析 | 第17页 |
| ·双水相萃取技术 | 第17页 |
| ·胆固醇氧化酶基因的研究进展 | 第17-19页 |
| ·已分离的胆固醇氧化酶基因 | 第17-18页 |
| ·链霉菌的胆固醇氧化酶基因choA | 第18-19页 |
| ·甾短杆菌的胆固醇氧化酶基因choB | 第19页 |
| ·胆固醇氧化酶及其产物的应用 | 第19-23页 |
| ·医药方面 | 第19-21页 |
| ·食品方面 | 第21-22页 |
| ·农业方面 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-30页 |
| 第二部分 实验 | 第30-92页 |
| 中文摘要 | 第30-32页 |
| 英文摘要 | 第32-34页 |
| 一 产胆固醇氧化酶菌种的筛选及鉴定 | 第34-46页 |
| 前言 | 第34页 |
| 1.材料及方法 | 第34-42页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·菌种 | 第34-35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第35-36页 |
| ·酶活力的测定 | 第36-38页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·酶活力测定工作液的配制 | 第37页 |
| ·测定过程 | 第37页 |
| ·酶活力单位的确定 | 第37-38页 |
| ·菌体培养 | 第38页 |
| ·酵母的培养 | 第38页 |
| ·细菌的培养 | 第38页 |
| ·缓冲液的配制 | 第38页 |
| ·生理盐水的配制 | 第38页 |
| ·的硼酸-硼砂缓冲液的配制 | 第38页 |
| ·菌体的破碎 | 第38-39页 |
| ·菌株的鉴定 | 第39-42页 |
| ·试剂的配制 | 第39-40页 |
| ·形态学鉴定 | 第40-41页 |
| ·生理生化检测 | 第41-42页 |
| 2.结果与分析 | 第42-45页 |
| ·产胆固醇氧化酶菌株的筛选 | 第42-43页 |
| ·B0503菌的鉴定 | 第43-45页 |
| ·形态学鉴定 | 第43-44页 |
| ·生理生化检测 | 第44-45页 |
| 3.结论 | 第45-46页 |
| 二 产胆固醇氧化酶菌种的培养基优化 | 第46-59页 |
| 前言 | 第46页 |
| 1.材料及方法 | 第46-50页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·菌种及培养基 | 第46-47页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第47-48页 |
| ·菌体培养 | 第48页 |
| ·无细胞粗酶液的提取 | 第48页 |
| ·酶活力的测定 | 第48-50页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·酶活性测定工作液的配制 | 第49页 |
| ·测定过程 | 第49-50页 |
| ·酶活力单位的确定 | 第50页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第50页 |
| ·胆固醇溶液的配制 | 第50页 |
| 2.结果与分析 | 第50-58页 |
| ·培养基的筛选 | 第51页 |
| ·培养基成分对胆固醇氧化酶形成的影响 | 第51-54页 |
| ·碳源的影响 | 第51-52页 |
| ·氮源的影响 | 第52-53页 |
| ·胆固醇含量的影响 | 第53-54页 |
| ·正交实验分析 | 第54页 |
| ·培养条件对胆固醇氧化酶产量的影响 | 第54-58页 |
| ·培养基pH对产酶量的影响 | 第54-55页 |
| ·培养温度对产酶量的影响 | 第55-56页 |
| ·通气量对产酶量的影响 | 第56页 |
| ·接种量对产酶量的影响 | 第56-57页 |
| ·菌种种龄对产酶量的影响 | 第57页 |
| ·培养时间对产酶量的影响 | 第57-58页 |
| 3.结论 | 第58-59页 |
| 三 胆固醇氧化酶的分离纯化 | 第59-77页 |
| 前言 | 第59页 |
| 1.材料及方法 | 第59-72页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·菌种 | 第60页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第60页 |
| ·酶活力的测定 | 第60-62页 |
| ·主要试剂 | 第60-61页 |
| ·酶活性测定工作液的配制 | 第61页 |
| ·测定过程 | 第61-62页 |
| ·酶活力单位的确定 | 第62页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第62-64页 |
| ·蛋白质标准溶液的配制 | 第62页 |
| ·考马斯亮蓝G-250染色液的配制 | 第62-63页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第63-64页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第64页 |
| ·缓冲液的配置 | 第64-66页 |
| ·PB缓冲液的配制 | 第64-65页 |
| ·磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲液的配制 | 第65-66页 |
| ·Tris-HCl缓冲液的配制 | 第66页 |
| ·无细胞粗酶液的提取 | 第66页 |
| ·无细胞粗酶液的提取预试 | 第66页 |
| ·无细胞粗酶液的提取 | 第66页 |
| ·粗酶液的初级分离 | 第66-67页 |
| ·粗酶液的初级分离预试 | 第66-67页 |
| ·粗酶液的初级分离 | 第67页 |
| ·脱盐 | 第67页 |
| ·阳离子交换层析 | 第67-68页 |
| ·阳离子交换层析预试 | 第67-68页 |
| ·阳离子交换层析柱的处理 | 第68页 |
| ·阳离子交换层析 | 第68页 |
| ·分子筛凝胶过滤层析 | 第68-69页 |
| ·SDS-PAGE | 第69-70页 |
| ·电泳凝胶的配制(不连续电泳) | 第69页 |
| ·电泳缓冲液的配制 | 第69页 |
| ·样品处理液的配制 | 第69页 |
| ·染色液和脱色液的配制 | 第69-70页 |
| ·电泳 | 第70页 |
| ·PAGE | 第70-71页 |
| ·电泳凝胶的配制(不连续电泳) | 第70-71页 |
| ·电泳缓冲液(pH4.5,pH6.2)的配制 | 第71页 |
| ·样品处理液的配制 | 第71页 |
| ·染色液和脱色液的配制 | 第71页 |
| ·电泳 | 第71页 |
| ·高压液相检测 | 第71-72页 |
| 2.结果与分析 | 第72-76页 |
| ·粗酶液的初级分离 | 第72页 |
| ·阳离子交换层析和分子筛凝胶过滤层析 | 第72-74页 |
| ·电泳结果 | 第74-75页 |
| ·纯度鉴定 | 第75-76页 |
| 3.结论 | 第76-77页 |
| 四 胆固醇氧化酶的性质研究 | 第77-92页 |
| 前言 | 第77页 |
| 1.材料及方法 | 第77-85页 |
| ·材料 | 第77-78页 |
| ·酶试剂 | 第77页 |
| ·仪器及试剂 | 第77-78页 |
| ·酶活力的测定 | 第78-80页 |
| ·主要试剂 | 第78-79页 |
| ·酶活性测定工作液的配制 | 第79页 |
| ·测定过程 | 第79页 |
| ·酶活力单位的确定 | 第79-80页 |
| ·缓冲液的配置 | 第80-81页 |
| ·磷酸缓冲液的配制 | 第80页 |
| ·磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲液的配制 | 第80-81页 |
| ·Tris-HCl缓冲液的配制 | 第81页 |
| ·最适pH和酸碱稳定性的分析 | 第81-82页 |
| ·最适温度和热稳定性分析 | 第82-83页 |
| ·米氏常数的测定 | 第83页 |
| ·过氧化氢标准曲线的绘制 | 第83页 |
| ·米氏常数的测定 | 第83页 |
| ·分子量测定 | 第83-85页 |
| ·Sephacryl S-200层析 | 第83-84页 |
| ·SDS-PAGE | 第84-85页 |
| ·部分金属离子和有机化合物对酶活力的影响 | 第85页 |
| 2.结果与分析 | 第85-91页 |
| ·胆固醇氧化酶的最适pH及pH稳定性研究 | 第85-87页 |
| ·胆固醇氧化酶的最适pH研究 | 第85页 |
| ·胆固醇氧化酶的pH稳定性研究 | 第85-87页 |
| ·胆固醇氧化酶的最适温度及温度稳定性研究 | 第87-88页 |
| ·胆固醇氧化酶的最适温度研究 | 第87页 |
| ·胆固醇氧化酶的温度稳定性研究 | 第87-88页 |
| ·胆固醇氧化酶的米氏常数 | 第88-89页 |
| ·胆固醇氧化酶的分子量 | 第89-90页 |
| ·化合物及金属离子对胆固醇氧化酶的影响 | 第90-91页 |
| 3.结论 | 第91-92页 |
| 总结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-95页 |
| 发表文章 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
