| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第1章 酿酒酵母谷氧还蛋白系统及硫氧还蛋白系统 | 第11-21页 |
| ·酿酒酵母及氧化应激反应 | 第11-13页 |
| ·谷氧还蛋白系统 | 第13-15页 |
| ·硫氧还蛋白系统 | 第15-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第16-21页 |
| 第2章 谷胱甘肽还原酶Glr1的晶体结构及生化分析 | 第21-41页 |
| ·引言 | 第21-23页 |
| ·材料与方法 | 第23-32页 |
| ·分泌型表达载体pPIC9K的构建 | 第23-25页 |
| ·蛋白表达检测 | 第25-27页 |
| ·线性化质粒 | 第25页 |
| ·乙醇沉淀法回收酶切质粒 | 第25-26页 |
| ·毕赤酵母GS115菌株感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·电转化 | 第26页 |
| ·G418抗性筛选多拷贝插入菌株 | 第26-27页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第27-28页 |
| ·蛋白结晶,衍射数据收集处理及结构解析 | 第28-32页 |
| ·Cys239谷胱甘肽化修饰的体外鉴定 | 第32页 |
| ·酶活检测与酶学动力学研究 | 第32页 |
| ·实验结果与讨论 | 第32-41页 |
| ·Glr1整体结构 | 第32-34页 |
| ·二聚体相互作用界面 | 第34-36页 |
| ·表面半胱氨酸Cys239谷胱甘肽化修饰 | 第36-38页 |
| ·糖基化位点Asn278及酶学动力学研究 | 第38-41页 |
| 第3章 谷氧还蛋白Grx1与Grx2不同氧化还原状态的晶体结构分析及活性差异分析 | 第41-72页 |
| ·引言 | 第41-42页 |
| ·材料与方法 | 第42-60页 |
| ·Grx1表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·Grx2表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第46-47页 |
| ·蛋白结晶,数据收集处理及结构解析 | 第47-60页 |
| ·Grx1氧化型与谷胱甘肽化型晶体的生长 | 第47页 |
| ·Grx1晶体衍射数据收集处理及结构解析 | 第47-54页 |
| ·Grx2氧化型与还原型晶体的生长 | 第54页 |
| ·Grx2晶体衍射数据收集处理及结构解析 | 第54-60页 |
| ·ITC方法测定Grx1与Grx2对GSH的解离常数 | 第60页 |
| ·实验结果与讨论 | 第60-72页 |
| ·Grx1整体结构 | 第60-61页 |
| ·Grx1中GSH结合位点 | 第61-64页 |
| ·Grx1中氧化还原导致的构象变化 | 第64-66页 |
| ·Grx2整体结构 | 第66-68页 |
| ·Grx2中氧化还原导致的构象变化 | 第68-69页 |
| ·还原型Grx2与谷胱甘肽化型Grx1的结构比较 | 第69-71页 |
| ·Grx1与Grx2对GSH结合能力的比较 | 第71-72页 |
| 第4章 烷基过氧化物还原酶Ahp1及类泛素修饰蛋白Urm1的晶体结构研究 | 第72-104页 |
| ·烷基过氧化物还原酶Ahp1的晶体结构及其催化活性半胱氨酸的鉴定 | 第72-89页 |
| ·引言 | 第72-74页 |
| ·材料与方法 | 第74-82页 |
| ·表达载体的构建 | 第74-76页 |
| ·突变表达载体的构建 | 第76-77页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第77-78页 |
| ·蛋白结晶,衍射数据收集处理及结构解析 | 第78-82页 |
| ·Ahp1催化活性分析 | 第82页 |
| ·实验结果与讨论 | 第82-89页 |
| ·Ahp1单体结构分析 | 第82-84页 |
| ·二聚体相互作用方式 | 第84-86页 |
| ·半胱氨酸在结构中的定位 | 第86-87页 |
| ·催化活性半胱氨酸的鉴定 | 第87-89页 |
| ·类泛素修饰蛋白Urm1的晶体结构及聚合状态研究 | 第89-104页 |
| ·引言 | 第89-90页 |
| ·材料与方法 | 第90-98页 |
| ·Urm1无His-tag及N端His-tag表达载体的构建 | 第90-92页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第92-93页 |
| ·Urm1无His-tag蛋白表达纯化 | 第92页 |
| ·Urm1 N端His-tag蛋白表达纯化 | 第92-93页 |
| ·蛋白结晶,数据收集处理及结构解析 | 第93-98页 |
| ·Urm1溶液分子量测定 | 第98页 |
| ·变复性检测Urm1/Urm1-6xHis-tag异二聚体 | 第98页 |
| ·实验结果与讨论 | 第98-104页 |
| ·Urm1整体结构 | 第98-99页 |
| ·二聚体相互作用界面分析 | 第99-102页 |
| ·二聚体Urm1的体外鉴定 | 第102-104页 |
| 第5章 结论与展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-118页 |
| 附录 实验试剂 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第122页 |
| 参加的学术会议 | 第122-123页 |
| 攻读博士学位期间完成的其他工作 | 第123页 |
