| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一篇 文献综述 | 第19-49页 |
| 第一章 布鲁氏菌病及其鉴别诊断研究进展 | 第19-49页 |
| 1 布鲁氏菌及布鲁氏菌病研究进展 | 第19-30页 |
| ·引言 | 第19-20页 |
| ·背景 | 第20页 |
| ·分类 | 第20-21页 |
| ·后基因组学 | 第21-22页 |
| ·蛋白组学 | 第22页 |
| ·与宿主相互关系 | 第22-23页 |
| ·疫苗研制 | 第23-26页 |
| ·诊断 | 第26-30页 |
| ·问题与展望 | 第30页 |
| 2 标记疫苗与鉴别诊断研究进展 | 第30-34页 |
| ·常规弱毒疫苗 | 第30-31页 |
| ·标记疫苗与鉴别诊断 | 第31-32页 |
| ·设计要求 | 第32-33页 |
| ·布鲁氏菌标记疫苗的研究近况 | 第33-34页 |
| 3 布鲁氏菌BP26基因与BP26蛋白研究进展 | 第34-36页 |
| ·布鲁氏菌属细菌基因组研究 | 第34-35页 |
| ·bp26基因的大小、位置与功能 | 第35-36页 |
| ·bp26蛋白的大小、位置与功能 | 第36页 |
| ·应用前景 | 第36页 |
| 参考文献 | 第36-49页 |
| 第二篇 试验研究 | 第49-141页 |
| 第二章:布鲁氏菌BP26基因的扩增、序列测定及其生物信息学分析 | 第49-65页 |
| 1. 材料与方法 | 第50-54页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·引物设计与合成 | 第50-51页 |
| ·沸水法提取细菌DNA,并测定dsDNA浓度 | 第51页 |
| ·扩增与电泳 | 第51-52页 |
| ·PCR产物纯化及cDNA含量测定 | 第52页 |
| ·序列测定 | 第52-54页 |
| ·bp26基因及编码蛋白的生物信息学分析 | 第54页 |
| 2. 结果 | 第54-59页 |
| ·bp26基因扩增与序列测定 | 第54-55页 |
| ·bp26基因及编码蛋白的生物信息学分析 | 第55-59页 |
| 3. 讨论 | 第59-61页 |
| ·模板DNA的制备 | 第59页 |
| ·PCR扩增及条件优化 | 第59页 |
| ·测序 | 第59页 |
| ·生物信息学分析 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 第三章:布鲁氏菌BP26和ABP26的基因克隆及其原核表达重组子的构建 | 第65-79页 |
| 1. 材料与方法 | 第65-73页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·方法 | 第66-73页 |
| 2. 试验结果 | 第73-75页 |
| ·PCR扩增 | 第73页 |
| ·PCR产物和质粒pQE32的双酶切 | 第73-74页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第74-75页 |
| ·酶切鉴定 | 第75页 |
| ·测序鉴定 | 第75页 |
| 3. 讨论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 第四章:几种重组布鲁氏菌BP26蛋白的抗原特性比较及M5-90-26标记疫苗鉴别诊断抗原的筛选 | 第79-91页 |
| 1. 材料与方法 | 第80-85页 |
| ·质粒与菌种 | 第80页 |
| ·重组子及重组蛋白的特性 | 第80-81页 |
| ·培养基及生长条件 | 第81页 |
| ·抗血清 | 第81页 |
| ·表达 | 第81-82页 |
| ·纯化 | 第82-83页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第83-84页 |
| ·Western blot分析 | 第84页 |
| ·△bp26-iELISA | 第84-85页 |
| 2. 结果 | 第85-86页 |
| ·重组蛋白表达纯化与鉴定(SDS-PAGE分析) | 第85页 |
| ·重组蛋白纯化抗原的Western blot分析 | 第85-86页 |
| ·重组蛋白纯化抗原的抗原特异性分析(iELISA试验)及鉴别诊断用抗原的筛选 | 第86页 |
| 3. 讨论 | 第86-88页 |
| ·抗布鲁氏菌bp26抗体阴、阳性参考血清 | 第86-87页 |
| ·bp26蛋白和重组bp26蛋白 | 第87页 |
| ·不同重组bp26蛋白的抗原特性 | 第87页 |
| ·鉴别诊断用重组蛋白的筛选 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 第五章:截短表达布鲁氏菌BP26基因重组融合蛋白纯化及其抗原特性分析 | 第91-103页 |
| 1. 材料与方法 | 第92-96页 |
| ·质粒与菌种 | 第92-93页 |
| ·培养基及生长条件 | 第93页 |
| ·试剂 | 第93页 |
| ·抗血清 | 第93页 |
| ·表达 | 第93-94页 |
| ·纯化 | 第94-95页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第95页 |
| ·LPS测定(endotoxin assay) | 第95-96页 |
| ·Western blot鉴定 | 第96页 |
| 2. 结果 | 第96-98页 |
| ·重组蛋白表达 | 第96-97页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第97-98页 |
| ·重组蛋白鉴定 | 第98页 |
| 3. 讨论 | 第98-100页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第98-99页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-103页 |
| 第六章:布鲁氏菌BP26抗体IELISA检测方法的建立和最适条件确定 | 第103-111页 |
| 1 材料和方法 | 第103-105页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·方法 | 第104-105页 |
| 2 结果 | 第105-108页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第105页 |
| ·血清最佳反应条件的确定 | 第105-106页 |
| ·酶标抗体(二抗)最佳反应条件的确定 | 第106页 |
| ·底物的最佳反应条件的确定 | 第106-108页 |
| 3 结论与讨论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-111页 |
| 第七章:布鲁氏菌BP26抗体IELISA方法的临界点确定及其在鉴别诊断上的初步应用 | 第111-121页 |
| 1. 材料与方法 | 第111-113页 |
| ·抗血清 | 第111-112页 |
| ·Δbp26-iELISA | 第112页 |
| ·初步应用 | 第112页 |
| ·数据统计与分析 | 第112-113页 |
| 2. 结果 | 第113-116页 |
| ·临界值(Cov)的确定 | 第113页 |
| ·临界值的优化 | 第113-114页 |
| ·M28的动物攻毒试验 | 第114-115页 |
| ·疫苗免疫试验 | 第115-116页 |
| ·现地检测 | 第116页 |
| 3. 讨论 | 第116-118页 |
| ·抗布鲁氏菌bp26抗体阴、阳性参考血清 | 第116-117页 |
| ·Δbp26-iELISA临界点的确定与优化 | 第117页 |
| ·攻毒和免疫试验 | 第117-118页 |
| ·鉴别诊断的临床验证 | 第118页 |
| ·适用条件与范围 | 第118页 |
| 参考文献 | 第118-121页 |
| 第八章:布鲁氏菌BP26抗体IELISA即用型试剂盒的研制 | 第121-131页 |
| 1. 材料与方法 | 第121-123页 |
| 2. 结果 | 第123-127页 |
| ·相对敏感性、相对特异性和符合率 | 第123页 |
| ·重复性试验 | 第123-125页 |
| ·保存期试验 | 第125-127页 |
| 3. 讨论 | 第127-128页 |
| ·敏感性与特异性试验 | 第127页 |
| ·老化试验和保存期试验 | 第127页 |
| ·重复性试验 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-131页 |
| 第九章:布鲁氏菌BP26蛋白的免疫原性研究 | 第131-141页 |
| 1. 材料与方法 | 第131-133页 |
| 2. 结果 | 第133-136页 |
| 3. 讨论 | 第136-138页 |
| 参考文献 | 第138-141页 |
| 全文总结 | 第141-143页 |
| 创新点 | 第143-145页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第145-147页 |
| 附录部分 | 第147-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
