| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 1 绪论 | 第11-26页 |
| ·植物叶片衰老 | 第11页 |
| ·植物叶片衰老的特征和机理 | 第11页 |
| ·影响植物叶片衰老的因素 | 第11-13页 |
| ·外部因素 | 第11-12页 |
| ·内部因素 | 第12-13页 |
| ·叶片衰老与作物产量 | 第13-14页 |
| ·细胞分裂素合成基因 ipt 及其基因工程研究进展 | 第14-20页 |
| ·细胞分裂素的生物功能 | 第14-15页 |
| ·异戊烯基转移酶( IPT）简介 | 第15页 |
| ·转异戊烯基转移酶基因的研究进展 | 第15-20页 |
| ·水稻转基因方法的研究进展 | 第20-23页 |
| ·花粉管通道法 | 第20页 |
| ·基因枪法 | 第20-21页 |
| ·PEG 法 | 第21页 |
| ·电激法 | 第21页 |
| ·农杆菌介导法 | 第21-23页 |
| ·研究的目的意义及技术路线 | 第23-26页 |
| ·研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| ·主要研究内容及技术路线 | 第24-26页 |
| 2 基因克隆及植物表达载体的构建 | 第26-44页 |
| ·材料与试剂 | 第26-28页 |
| ·供试材料、质粒、菌株、试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·常用试剂配制 | 第26-28页 |
| ·实验方法 | 第28-30页 |
| ·根癌农杆菌C58 Ti 质粒DNA 提取 | 第28页 |
| ·拟南芥叶片基因组DNA 小量提取（修改的CTAB 法） | 第28-29页 |
| ·小量碱裂解法提取质粒 | 第29页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备（TaKaRa Competent Cell Preparation Kit） | 第29-30页 |
| ·核酸的电泳及纯度、浓度测定 | 第30页 |
| ·菌种保存 | 第30页 |
| ·ipt 基因和 SAG12 启动子的克隆 | 第30-33页 |
| ·ipt 基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·SAG12 基因启动子的克隆 | 第31-32页 |
| ·DNA 片段快速回收（试剂盒采用OMEGA 公司产品） | 第32页 |
| ·DNA 连接 | 第32页 |
| ·质粒DNA 的转化 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的PCR 和酶切鉴定 | 第33页 |
| ·序列测定 | 第33页 |
| ·植物双元表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·pCAMBIA1301-ipt 中间载体的构建 | 第33页 |
| ·pCAMBIA1301-SAG12-ipt 植物表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·根癌农杆菌的转化 | 第34-35页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第34-35页 |
| ·农杆菌的PCR 鉴定 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-42页 |
| ·ipt 基因的扩增、克隆和测序 | 第35-37页 |
| ·启动子的PCR 扩增、克隆和测序 | 第37-39页 |
| ·pCAMBIA1301-ipt 载体的构建 | 第39页 |
| ·pCAMBIA1301-SAG12-ipt 植物表达载体的构建 | 第39-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·根癌农杆菌Ti 质粒的提取 | 第42页 |
| ·基因和启动子的克隆 | 第42页 |
| ·表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3 水稻遗传转化体系的建立 | 第44-47页 |
| ·材料与试剂设备 | 第44页 |
| ·生物材料 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导 | 第44页 |
| ·植株再生 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第45页 |
| ·干燥处理对愈伤组织分化的影响 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·培养基对愈伤组织的影响 | 第45-46页 |
| ·干燥处理对愈伤组织分化的影响 | 第46-47页 |
| 4 农杆菌介导法转化水稻 | 第47-54页 |
| ·材料与试剂设备 | 第47页 |
| ·供试材料、试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·农杆菌的培养 | 第47-48页 |
| ·共培养 | 第48页 |
| ·洗菌与选择 | 第48页 |
| ·分化与生根 | 第48页 |
| ·潮霉素本底抗性测定 | 第48页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-52页 |
| ·水稻胚性愈伤组织的获得 | 第49-50页 |
| ·潮霉素本底抗性的测定 | 第50页 |
| ·转基因水稻植株的获得 | 第50-51页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| ·转化受体 | 第52页 |
| ·共培养时间对于转化的影响 | 第52页 |
| ·选择标记 | 第52-54页 |
| 5 结论与展望 | 第54-55页 |
| ·主要结论 | 第54页 |
| ·后续研究工作展望 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63-67页 |
| 附件一：NB 培养基 | 第64-65页 |
| 附件二：N6 培养基 | 第65-67页 |
