| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-21页 |
| ·副猪嗜血杆菌的研究现状 | 第12-16页 |
| ·病原学 | 第12-13页 |
| ·危害与防制 | 第13页 |
| ·致病机理研究进展 | 第13-14页 |
| ·毒力因子研究进展 | 第14-16页 |
| ·脂多糖(LPS) | 第15页 |
| ·外膜蛋白(OMP) | 第15页 |
| ·转铁结合蛋白(TBP) | 第15页 |
| ·神经氨酸酶(NA) | 第15-16页 |
| ·荚膜多糖(CPS) | 第16页 |
| ·SCOTS技术概述 | 第16-19页 |
| ·多种差异显示技术比较 | 第16-19页 |
| ·差异显示 PCR(DD-PCR) | 第16-17页 |
| ·抑制消减杂交法(SSH) | 第17页 |
| ·DNA芯片技术(DNA chip technique) | 第17页 |
| ·基因表达系统分析(SAGE) | 第17-18页 |
| ·体内表达技术(IVET) | 第18页 |
| ·信号标签突变技术(STM) | 第18页 |
| ·代表性差异分析(RDA) | 第18-19页 |
| ·SCOTS技术原理与应用 | 第19页 |
| ·反向斑点杂交技术 | 第19-21页 |
| ·反向斑点杂交技术的原理 | 第19-20页 |
| ·反向斑点杂交技术的应用 | 第20-21页 |
| 第2章 SCOTS技术的建立 | 第21-35页 |
| ·目的及意义 | 第21页 |
| ·材料与方法 | 第21-28页 |
| ·菌株质粒、培养条件及PCR引物 | 第21页 |
| ·主要药品、试剂和仪器 | 第21-22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·分子生物学软件 | 第22页 |
| ·细菌计数 | 第22页 |
| ·实验动物的分组与感染 | 第22-23页 |
| ·菌株的分离与鉴定 | 第23页 |
| ·感染组织总RNA的提取及细菌RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·cDNA的合成和扩增 | 第24页 |
| ·转录序列的选择性捕获(SCOTS) | 第24-27页 |
| ·细菌基因组的提取及其生物素标记 | 第25页 |
| ·细菌rDNA的合成 | 第25-26页 |
| ·cDNA样品的预杂交及杂交 | 第26页 |
| ·转录序列的捕获 | 第26页 |
| ·SCOTS文库的克隆 | 第26-27页 |
| ·反向斑点杂交方法的建立 | 第27-28页 |
| ·反向斑点杂交的操作方法 | 第27页 |
| ·靶DNA浓度、探针浓度、紫外照射剂量的优化 | 第27-28页 |
| ·PCR片段与基因组、体内和体外cDNA文库分别进行斑点杂交 | 第28页 |
| ·测序评价反向点杂交法对cDNA文库筛选的可行性 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-33页 |
| ·细菌计数 | 第28页 |
| ·实验动物的感染 | 第28页 |
| ·菌株的分离与鉴定 | 第28-29页 |
| ·感染组织RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·SCOTS库的建立 | 第30页 |
| ·靶DNA浓度、探针浓度、紫外照射剂量的优化 | 第30-32页 |
| ·PCR片段与基因组、消减了核糖体 DNA的体内和体外cDNA文库分别进行斑点杂交 | 第32-33页 |
| ·测序评价反向点杂交法对cDNA文库筛选的可行性 | 第33页 |
| ·结论及讨论 | 第33-35页 |
| 第3章 用SCOTS技术筛选副猪嗜血杆菌高温应激基因 | 第35-44页 |
| ·目的与意义 | 第35页 |
| ·材料与方法 | 第35-38页 |
| ·菌株、质粒、培养条件及 PCR引物 | 第35页 |
| ·主要药品、试剂和仪器 | 第35-36页 |
| ·分子生物学软件 | 第36页 |
| ·细菌 RNA的提取 | 第36页 |
| ·cDNA的合成和扩增 | 第36-37页 |
| ·细菌基因组的提取及其生物素标记 | 第37页 |
| ·cDNA样品的预杂交及杂交 | 第37页 |
| ·转录序列的捕获 | 第37-38页 |
| ·SCOTS文库的克隆 | 第38页 |
| ·反向斑点杂交筛选高温应激基因 | 第38页 |
| ·DNA测序与功能注释 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-42页 |
| ·应用SCOTS技术获得的副猪嗜血杆菌高温应激功能基因 | 第38-41页 |
| ·获得的副猪嗜血杆菌高温应激基因与毒力因子之间的关系 | 第41页 |
| ·获得的副猪嗜血杆菌高温应激基因的应用前景 | 第41-42页 |
| ·结论及讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 附录 | 第50页 |
