| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 缩略语 | 第10-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-19页 |
| ·NRDR与RA代谢 | 第12页 |
| ·人NRDR剪接亚型及NRDR定位信号 | 第12-13页 |
| ·蛋白定位与定位信号 | 第13-17页 |
| ·基因产物不同导致蛋白定位不同 | 第15页 |
| ·蛋白自身具有多个定位信号 | 第15-17页 |
| ·本课题的研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 第2章 A2的原核表达及多克隆抗体制备 | 第19-33页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·质粒与菌株 | 第19页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·酶、试剂盒及主要试剂 | 第19页 |
| ·蛋白检测相关试剂 | 第19页 |
| ·抗生素及培养基 | 第19-20页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot相关溶液 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·目的片段获得 | 第21-22页 |
| ·入门克隆构建 | 第22-23页 |
| ·原核表达质粒构建 | 第23页 |
| ·E. coli表达菌株的构建 | 第23-24页 |
| ·诱导表达及菌株筛选 | 第24页 |
| ·蛋白电泳样品处理及SDS-PAGE | 第24页 |
| ·确定蛋白表达最佳时间和表达形式 | 第24-25页 |
| ·Western blot检测融合蛋白表达 | 第25页 |
| ·抗原蛋白准备 | 第25页 |
| ·制备兔抗人A2抗血清 | 第25-26页 |
| ·Dot-blot测定多抗血清效价 | 第26-27页 |
| ·结果 | 第27-31页 |
| ·入门克隆及原核表达质粒构建 | 第27页 |
| ·诱导表达及菌株筛选 | 第27-28页 |
| ·确定蛋白表达最佳时间和表达形式 | 第28-29页 |
| ·Western blot检测融合蛋白表达 | 第29-30页 |
| ·抗原蛋白准备 | 第30页 |
| ·抗血清效价测定 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第3章 A2的真核表达及定位分析 | 第33-44页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·质粒与菌株 | 第33页 |
| ·细胞系与细胞培养基 | 第33页 |
| ·酶及试剂盒 | 第33页 |
| ·免疫荧光试剂及染料 | 第33页 |
| ·相关试剂配制 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| ·PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·重组载体构建与鉴定 | 第35-36页 |
| ·细胞培养与转染 | 第36-37页 |
| ·细胞核DAPI染色及荧光显微镜观察 | 第37页 |
| ·免疫荧光检测外源蛋白定位 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-42页 |
| ·A2和NLS重组质粒构建与鉴定 | 第37-38页 |
| ·A2片段重组质粒构建与鉴定 | 第38-39页 |
| ·A2 native表达及Flag-A2重组表达质粒构建与鉴定 | 第39页 |
| ·瞬时转染哺乳动物细胞 | 第39-41页 |
| ·A2和NLS的GFP融合蛋白分布 | 第41页 |
| ·A2片段的GFP融合蛋白分布 | 第41页 |
| ·native A2和Flag融合蛋白分布 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第4章 兔NRDR的定位分析 | 第44-54页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·质粒与菌株 | 第44页 |
| ·实验动物 | 第44页 |
| ·细胞系与细胞培养基 | 第44页 |
| ·酶、试剂盒及主要试剂 | 第44页 |
| ·免疫荧光试剂及染料 | 第44-45页 |
| ·主要试剂配制 | 第45页 |
| ·细胞培养用抗生素配制 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-48页 |
| ·入门克隆构建 | 第45-46页 |
| ·真核表达载体构建 | 第46-47页 |
| ·兔肝、兔肾原代细胞分离 | 第47页 |
| ·细胞培养与转染 | 第47页 |
| ·融合蛋白定位分析 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-52页 |
| ·载体构建与鉴定 | 第48-49页 |
| ·原代细胞的分离及培养 | 第49页 |
| ·瞬时转染哺乳动物细胞 | 第49-50页 |
| ·兔肾原代细胞中融合蛋白的分布 | 第50-52页 |
| ·COS-7细胞中融合蛋白的分布 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59页 |