| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 主要符号对照表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-18页 |
| 1.1 流感病毒概述 | 第12-13页 |
| 1.2 流感病毒基因组结构 | 第13页 |
| 1.3 流感病毒的vRNP复合体 | 第13-14页 |
| 1.4 抗原表位的鉴定方法 | 第14-16页 |
| 1.4.1 多肽合成技术 | 第14-15页 |
| 1.4.2 氨基酸定点突变技术 | 第15页 |
| 1.4.3 肽扫描技术 | 第15页 |
| 1.4.4 X射线晶体学与核磁共振技术 | 第15页 |
| 1.4.5 噬菌体展示技术 | 第15-16页 |
| 1.5 胶体金免疫层析试纸条 | 第16页 |
| 1.6 目的与意义 | 第16-18页 |
| 第二章 抗流感病毒聚合酶蛋白和NP蛋白单克隆抗体的制备 | 第18-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第18页 |
| 2.1.1 载体、菌种、病毒、细胞和试验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-25页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第18-19页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建和鉴定 | 第19-21页 |
| 2.2.3 重组蛋白PB2-1、PB2-2、PB1-1、PB1-2、PA-1、PA-2和NP-1、NP-2的表达与纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.4 抗PB2、PB1、PA和 NP单克隆抗体的制备 | 第22-24页 |
| 2.2.5 腹水的制备 | 第24页 |
| 2.2.6 单克隆抗体的纯化 | 第24页 |
| 2.2.7 单克隆抗体的亚类鉴定 | 第24页 |
| 2.2.8 单克隆抗体的Western Blot检测 | 第24-25页 |
| 2.2.9 单克隆抗体的广谱性检测 | 第25页 |
| 2.3 试验结果 | 第25-34页 |
| 2.3.1 重组蛋白的小量表达 | 第25页 |
| 2.3.2 重组蛋白的大量表达 | 第25-26页 |
| 2.3.3 重组蛋白的纯化 | 第26页 |
| 2.3.4 检测免疫BALB/c小鼠血清效价 | 第26-27页 |
| 2.3.5 建立i ELISA方法的最佳工作浓度 | 第27页 |
| 2.3.6 筛选阳性杂交瘤细胞 | 第27页 |
| 2.3.7 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第27-29页 |
| 2.3.8 单克隆抗体的Western Blot检测 | 第29-32页 |
| 2.3.9 单克隆抗体的广谱性检测 | 第32-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 流感病毒聚合酶蛋白和NP蛋白抗原表位鉴定 | 第35-53页 |
| 3.1 试验材料 | 第35页 |
| 3.1.1 主要细胞、载体、感受态 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-44页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第35-40页 |
| 3.2.2 多肽合成 | 第40页 |
| 3.2.3 pCAGGS-GST截短质粒的构建与表达 | 第40-42页 |
| 3.2.4 NP-p MD18T截短质粒的构建与表达 | 第42-43页 |
| 3.2.5 NP-p CAGGS-GST删除质粒的构建 | 第43页 |
| 3.2.6 瞬时转染试验 | 第43页 |
| 3.2.7 免疫印迹试验检测截短质粒和删除质粒的表达 | 第43-44页 |
| 3.2.8 免疫印迹试验检测单克隆抗体识别的抗原表位 | 第44页 |
| 3.3 结果 | 第44-52页 |
| 3.3.1 免疫印迹试验检测截短质粒和删除质粒的表达 | 第44-48页 |
| 3.3.2 免疫印迹试验检测单克隆抗体识别的抗原表位 | 第48-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 抗聚合酶蛋白和NP蛋白单克隆抗体的应用性 | 第53-61页 |
| 4.1 试验材料 | 第53页 |
| 4.1.1 细胞、病毒 | 第53页 |
| 4.1.2 试验试剂和仪器 | 第53页 |
| 4.2 方法 | 第53-54页 |
| 4.2.1 病毒感染 | 第53页 |
| 4.2.2 激光共聚焦试验 | 第53-54页 |
| 4.2.3 免疫共沉淀试验(CO-IP) | 第54页 |
| 4.3 结果 | 第54-59页 |
| 4.3.1 激光共聚焦试验检测单克隆抗体的应用 | 第54-57页 |
| 4.3.2 单克隆抗体应用于免疫共沉淀试验 | 第57-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 快速检测流感病毒胶体金试纸条的研制 | 第61-68页 |
| 5.1 试验材料 | 第61-62页 |
| 5.1.1 病毒 | 第61页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第61页 |
| 5.1.3 溶液配制 | 第61-62页 |
| 5.2 胶体金试纸条的组装 | 第62-64页 |
| 5.2.1 胶体金标记抗体最佳pH值的确定 | 第62页 |
| 5.2.2 胶体金标记抗体最佳标记量的确定 | 第62页 |
| 5.2.3 胶体金标记抗体的方法 | 第62页 |
| 5.2.4 胶体金试纸条检测线和质控线包被抗体浓度的确定 | 第62页 |
| 5.2.5 胶体金试纸条最佳硝酸纤维素膜的选择 | 第62-63页 |
| 5.2.6 胶体金试纸条最佳膜烘干时间的选择 | 第63页 |
| 5.2.7 胶体金试纸条最佳观察时间的选择 | 第63页 |
| 5.2.8 胶体金试纸条的组装过程 | 第63页 |
| 5.2.9 胶体金试纸条结果的判定 | 第63页 |
| 5.2.10 胶体金试纸条的广谱性 | 第63-64页 |
| 5.3 结果 | 第64-66页 |
| 5.3.1 胶体金标记抗体最佳pH值的确定 | 第64页 |
| 5.3.2 胶体金标记抗体最佳标记量的确定 | 第64-65页 |
| 5.3.3 胶体金试纸条检测线和质控线包被抗体浓度的确定 | 第65页 |
| 5.3.4 胶体金试纸条最佳硝酸纤维素膜的选择 | 第65页 |
| 5.3.5 胶体金试纸条最佳膜烘干时间的选择 | 第65页 |
| 5.3.6 胶体金试纸条最佳检测时间的选择 | 第65页 |
| 5.3.7 胶体金试纸条的广谱性 | 第65-66页 |
| 5.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第六章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 作者简历 | 第79页 |
