| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 泛素基因的研究进展 | 第9-14页 |
| ·泛素的概念 | 第9页 |
| ·泛素的研究历史 | 第9页 |
| ·泛素的类型 | 第9-10页 |
| ·泛素的主要生物学功能 | 第10-11页 |
| ·泛素样小修饰物的分子生物学研究 | 第11-12页 |
| ·应用与展望 | 第12-13页 |
| ·本实验的研究目的与意义 | 第13-14页 |
| 第二章 实验材料 | 第14-16页 |
| ·质粒和菌株 | 第14页 |
| ·常用培养基和溶液及试剂的配制 | 第14页 |
| ·酶和生化试剂 | 第14页 |
| ·引物 | 第14-15页 |
| ·主要仪器和设备 | 第15-16页 |
| 第三章 实验方法 | 第16-27页 |
| ·人泛素基因的合成、克隆及序列分析 | 第16-23页 |
| ·目的基因的合成 | 第16-18页 |
| ·人泛素基因原核表达载体的构建 | 第18-21页 |
| ·大肠杆菌超级感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| ·重组克隆载体的转化 | 第22页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第22页 |
| ·阳性重组质粒的筛选 | 第22-23页 |
| ·抽提阳性重组质粒 | 第23页 |
| ·DNA 序列分析 | 第23页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中表达的初步研究 | 第23-25页 |
| ·E.coli BL21(DE3)超级感受态菌的制备 | 第23-24页 |
| ·表达重组质粒转化表达宿主菌E.coli BL21(DE3) | 第24页 |
| ·诱导温度对目的蛋白表达的影响 | 第24页 |
| ·诱导剂IPTG 浓度对目的蛋白表达的影响 | 第24页 |
| ·诱导时间对目的蛋白表达的影响 | 第24-25页 |
| ·蛋白的提取和纯化及鉴定 | 第25-27页 |
| ·菌体的收集 | 第25页 |
| ·菌体的裂解 | 第25页 |
| ·目的蛋白纯化-亲和层析 | 第25页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE 鉴定 | 第25-26页 |
| ·目的蛋白的Western blot 鉴定 | 第26-27页 |
| 第四章 实验结果 | 第27-33页 |
| ·PCR 扩增产物 | 第27-28页 |
| ·目的基因PCR 产物的纯化 | 第28页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·DNA 测序结果 | 第29页 |
| ·诱导温度对目的蛋白表达的影响 | 第29-30页 |
| ·诱导剂IPTG 浓度对目的蛋白表达的影响 | 第30页 |
| ·诱导时间对目的蛋白表达的影响 | 第30-31页 |
| ·目的蛋白的表达纯化及鉴定 | 第31-33页 |
| 第五章 讨论 | 第33-35页 |
| ·立题依据 | 第33页 |
| ·目的基因的设计和载体的选择 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白表达及纯化 | 第34页 |
| ·目的蛋白检测结果分析 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 附录1 | 第38-40页 |
| 附录 2 | 第40-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 个人简历 | 第43页 |