| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 转录因子Nanog 基因的研究进展 | 第12-21页 |
| ·Nanog 基因的克隆 | 第13页 |
| ·Nanog 基因的结构 | 第13-14页 |
| ·Nanog 基因的表达 | 第14-16页 |
| ·Nanog 的正常表达 | 第14页 |
| ·Nanog 的缺失 | 第14-15页 |
| ·Nanog 的超表达 | 第15-16页 |
| ·Nanog 维持胚胎干细胞自我更新能力机制 | 第16-17页 |
| ·Nanog 与胚胎干细胞中其它因子之间的关系 | 第17-20页 |
| ·Nanog 与STAT3 | 第18页 |
| ·Nanog 与MAP-kinase | 第18页 |
| ·Nanog 与BMP | 第18页 |
| ·Nanog 和分化抑制 | 第18-19页 |
| ·Nanog 和Oct4，Sox2 | 第19-20页 |
| ·Nanog 基因抗体制备的研究进展 | 第20-21页 |
| 第二章 大肠杆菌表达系统 | 第21-30页 |
| ·大肠杆菌表达载体 | 第21-23页 |
| ·融合表达载体 | 第21-22页 |
| ·共表达载体 | 第22页 |
| ·双杂交系统 | 第22页 |
| ·Univector 系统 | 第22-23页 |
| ·表达宿主菌 | 第23-24页 |
| ·代谢工程 | 第23页 |
| ·定向进化 | 第23-24页 |
| ·蛋白质的糖基化 | 第24页 |
| ·重组蛋白的表达定位 | 第24-26页 |
| ·细胞质表达 | 第24-25页 |
| ·分泌表达 | 第25-26页 |
| ·融合表达系统 | 第26-30页 |
| ·蛋白A(PA)和蛋白G(PG)系统 | 第27-28页 |
| ·组氨酸(His)融合系统 | 第28页 |
| ·GST(glutathions s-transferase)系统 | 第28-29页 |
| ·FLAG 系统 | 第29页 |
| ·麦芽糖结合蛋白(MBP)系统 | 第29-30页 |
| 第三章 包涵体的形成及复性的研究 | 第30-38页 |
| ·包涵体特性 | 第30页 |
| ·包涵体的形成 | 第30-31页 |
| ·包涵体形成的原因 | 第30-31页 |
| ·包涵体的形成机制 | 第31页 |
| ·包涵体的复性机制 | 第31-32页 |
| ·包涵体蛋白的复性 | 第32-38页 |
| ·复性前准备 | 第32-33页 |
| ·包涵体的复性方法 | 第33-35页 |
| ·包涵体蛋白复性效率 | 第35-37页 |
| ·复性蛋白质的检测 | 第37-38页 |
| 第四章 小鼠Nanog 基因的原核表达及蛋白纯化 | 第38-63页 |
| ·材料与方法 | 第39-48页 |
| ·材料 | 第39-42页 |
| ·方法 | 第42-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-57页 |
| ·PCR 扩增 | 第48-49页 |
| ·重组表达载体pET-32a-Nanog 的构建 | 第49-51页 |
| ·Nanog 基因的诱导表达 | 第51页 |
| ·Nanog 蛋白表达条件的优化 | 第51-53页 |
| ·Nanog 融合蛋白表达形式 | 第53页 |
| ·His-Nanog 融合蛋白包涵体的洗涤 | 第53-54页 |
| ·His-Nanog 融合蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| ·His-Nanog 融合蛋白的浓度产量测定 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-61页 |
| ·关于Nanog 基因的PCR 扩增 | 第57页 |
| ·关于重组质粒的构建及鉴定 | 第57-59页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第59页 |
| ·目的蛋白表达条件的优化 | 第59-60页 |
| ·目的蛋白的表达形式 | 第60页 |
| ·目的蛋白的纯化策略 | 第60-61页 |
| ·蛋白浓度测定方法的选择 | 第61页 |
| ·小结 | 第61-63页 |
| 第五章 兔抗小鼠Nanog 多克隆抗体的制备及检测 | 第63-73页 |
| ·材料与方法 | 第63-67页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-68页 |
| ·western blot 检测抗血清的特异性 | 第67页 |
| ·间接ELISA 对抗体效价的测定 | 第67-68页 |
| ·免疫细胞化学法鉴定自制抗体与天然Nanog 蛋白的反应性 | 第68页 |
| ·讨论 | 第68-72页 |
| ·重组蛋白的抗血清制备 | 第68-70页 |
| ·Western blot 的检测 | 第70页 |
| ·间接ELISA 法测抗体效价 | 第70-71页 |
| ·关于免疫细胞化学技术 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 作者简介 | 第85页 |
