猪瘟病毒SPA协同凝集试验及双夹心ELISA检测方法的建立
| 1 引言 | 第1-16页 |
| ·猪瘟的历史及危害 | 第9页 |
| ·猪瘟的流行病学特征 | 第9-10页 |
| ·猪瘟病毒的病原学特征 | 第10-13页 |
| ·CSFV的形态结构 | 第10-11页 |
| ·CSFV的培养特性 | 第11页 |
| ·CSFV的理化特性 | 第11页 |
| ·CSFV的血清型和毒力 | 第11页 |
| ·CSFV的基因组结构 | 第11-13页 |
| ·猪瘟实验室诊断技术研究进展 | 第13-14页 |
| ·动物接种试验 | 第13页 |
| ·血清学试验 | 第13-14页 |
| ·分子生物学诊断方法 | 第14页 |
| ·猪瘟的预防和控制 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-27页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·毒株与细胞 | 第16页 |
| ·细胞培养所需主要试剂 | 第16页 |
| ·抗体及免疫球蛋白IgG制备所需主要试剂 | 第16页 |
| ·对流免疫电泳及其检测所需主要试剂 | 第16-17页 |
| ·免疫球蛋白IgG制备及对流免疫电泳所需主要溶液 | 第17页 |
| ·SPA协同凝集试验及其检测所需主要试剂 | 第17页 |
| ·双夹心ELISA检测所需主要试剂 | 第17-18页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·CSFV抗原的制备 | 第18-20页 |
| ·CSFV-F_(114)毒株抗原的制备 | 第18-19页 |
| ·HCLV毒株抗原的制备 | 第19页 |
| ·HCLV毒株犊牛睾丸细胞毒的浓缩与纯化 | 第19-20页 |
| ·HCLV毒株兔淋脾毒的纯化 | 第20页 |
| ·猪瘟阳性血清的制备 | 第20-21页 |
| ·兔抗HCLV高免血清的制备 | 第20页 |
| ·猪抗HCLV高免血清的制备 | 第20-21页 |
| ·免疫球蛋白IgG的制备 | 第21页 |
| ·兔抗HCLV免疫球蛋白IgG粗提物的制备 | 第21页 |
| ·猪抗HCLV免疫球蛋白IgG粗提物的制备 | 第21页 |
| ·对流免疫电泳试验检测血清抗体效价 | 第21-22页 |
| ·制备琼脂板 | 第21-22页 |
| ·点样 | 第22页 |
| ·电泳 | 第22页 |
| ·SPA协同凝集试验检测CSFV抗原方法的建立 | 第22-24页 |
| ·SPA菌稳定液的制备 | 第22页 |
| ·SPA菌诊断液的制备 | 第22-23页 |
| ·组织病毒液的制备 | 第23页 |
| ·血清最佳标记浓度及抗原检出浓度的确定 | 第23页 |
| ·两种血清标记的SPA诊断液的灵敏度对比试验 | 第23页 |
| ·CSFV SPA诊断液的特异性试验 | 第23-24页 |
| ·检测部位的确定 | 第24页 |
| ·对比对流免疫电泳试验 | 第24页 |
| ·CSFV SPA诊断液的重复性试验 | 第24页 |
| ·保存期试验 | 第24页 |
| ·临床样本的检测 | 第24页 |
| ·双夹心ELISA检测CSFV抗原方法的建立 | 第24-27页 |
| ·方阵法确定最佳工作条件 | 第24-25页 |
| ·酶标抗体最适浓度的确定 | 第25页 |
| ·包被抗体最适浓度的确定 | 第25页 |
| ·底物最适作用时间的确定 | 第25页 |
| ·双夹心ELISA操作程序 | 第25页 |
| ·双夹心ELISA特异性测定 | 第25-26页 |
| ·双夹心ELISA敏感性测定 | 第26页 |
| ·双夹心ELISA重复性测定 | 第26页 |
| ·临床样本的检测 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-35页 |
| ·CSFV抗原制备的结果 | 第27-28页 |
| ·CSFV-F_(114)株抗原的制备 | 第27页 |
| ·HCLV株犊牛睾丸细胞毒的制备 | 第27-28页 |
| ·免疫血清的制备及血清抗体效价的测定 | 第28页 |
| ·免疫球蛋白IgG制备的结果 | 第28-29页 |
| ·SPA协同凝集试验检测CSFV抗原的结果 | 第29-32页 |
| ·血清最佳标记浓度的确定 | 第29页 |
| ·CSFV SPA诊断液的灵敏度试验 | 第29页 |
| ·两种血清标记的SPA诊断液的灵敏度对比试验 | 第29-30页 |
| ·CSFV SPA诊断液的特异性试验 | 第30页 |
| ·最佳检测部位的确定 | 第30-31页 |
| ·对比对流免疫电泳试验 | 第31页 |
| ·CSFV SPA诊断液的重复性试验 | 第31-32页 |
| ·保存期试验结果 | 第32页 |
| ·临床样本的检测结果 | 第32页 |
| ·双夹心ELISA检测CSFV抗原的结果 | 第32-35页 |
| ·最佳反应条件选择结果 | 第32页 |
| ·包被抗体与酶标抗体最佳工作浓度的结果 | 第32页 |
| ·最适包被时间的确定 | 第32页 |
| ·双夹心ELISA特异性测定 | 第32-33页 |
| ·双夹心ELISA敏感性测定 | 第33-34页 |
| ·双夹心ELISA重复性测定 | 第34页 |
| ·临床样本的检测结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| ·猪瘟病毒的增殖 | 第35-36页 |
| ·细胞培养中病毒的检测 | 第36页 |
| ·高免血清的制备 | 第36页 |
| ·协同凝集试验检测CSFV抗原 | 第36-37页 |
| ·双夹心ELISA检测CSFV抗原 | 第37-38页 |
| 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| 个人简历 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45页 |
