| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 缩略语表 | 第17-19页 |
| 1 前言 | 第19-39页 |
| ·课题的提出 | 第19-22页 |
| ·前人研究进展 | 第22-38页 |
| ·单宁的分类、组成及用途 | 第22-23页 |
| ·单宁的生成、转运及聚合 | 第23-30页 |
| ·单宁生成途径 | 第24-25页 |
| ·核心类黄酮途径关键酶基因 | 第25-27页 |
| ·单宁特异生成途径关键酶基因 | 第27-28页 |
| ·单宁前体物质转运跨膜与聚合 | 第28-30页 |
| ·MYB转录因子与单宁的生成 | 第30-34页 |
| ·MYB转录因子结构特征 | 第31页 |
| ·MYB转录因子与单宁的生成 | 第31-34页 |
| ·bHLH转录因子与单宁的生成 | 第34-36页 |
| ·bHLH转录因子结构特征 | 第34-35页 |
| ·bHLH转录因子与单宁的生成 | 第35-36页 |
| ·WD40转录因子与单宁的生成 | 第36-37页 |
| ·WD40转录因子结构特征 | 第36页 |
| ·WD40转录因子与单宁的生成 | 第36-37页 |
| ·柿单宁与柿果脱涩 | 第37-38页 |
| ·研究目的和研究内容 | 第38-39页 |
| 2 发育期柿果单宁含量测定及分析 | 第39-50页 |
| ·前言 | 第39页 |
| ·材料与方法 | 第39-41页 |
| ·试验材料 | 第39页 |
| ·可溶性单宁含量测定 | 第39-40页 |
| ·不溶性单宁含量测定 | 第40页 |
| ·单宁定性分析 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-48页 |
| ·柿果发育过程中可溶性单宁含量变化 | 第42-44页 |
| ·柿果发育过程中不溶性单宁含量变化 | 第44-47页 |
| ·柿果实发育过程中单宁定性分析 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 3 柿MYB转录因子的基因克隆、表达及功能分析 | 第50-73页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·试验材料 | 第50页 |
| ·本研究所用试材 | 第50页 |
| ·载体与菌株 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-59页 |
| ·总DNA提取 | 第50-51页 |
| ·总RNA提取 | 第51-52页 |
| ·DNA与RNA质量及浓度检测 | 第52页 |
| ·cDNA合成 | 第52-54页 |
| ·MYB基因克隆及测序 | 第54-57页 |
| ·MYB基因片段PCR扩增 | 第54页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第54页 |
| ·目的片段与克隆载体连接 | 第54-55页 |
| ·感受态细胞制备 | 第55页 |
| ·重组质粒的转化与测序 | 第55-56页 |
| ·3'RACE及5'Hi-TAIL PCR扩增 | 第56-57页 |
| ·MYB基因全长扩增 | 第57页 |
| ·生物信息学分析 | 第57-58页 |
| ·实时定量表达分析 | 第58页 |
| ·柿MYB基因分析 | 第58-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-69页 |
| ·DNA与RNA提取结果 | 第59页 |
| ·反转录前去除基因组DNA | 第59-60页 |
| ·MYB基因的克隆 | 第60-61页 |
| ·DkPA1蛋白序列分析 | 第61-63页 |
| ·DkPA1 DNA序列分析 | 第63-66页 |
| ·DkPA1基因的时空表达分析 | 第66-69页 |
| ·讨论 | 第69-73页 |
| ·DkPA1基因的分离及序列分析 | 第69-71页 |
| ·DkPA1表达分析 | 第71-73页 |
| 4 柿bHLH转录因子基因克隆、表达及分析 | 第73-84页 |
| ·前言 | 第73页 |
| ·试验材料 | 第73页 |
| ·本研究所用试材 | 第73页 |
| ·试验方法 | 第73-75页 |
| ·总DNA提取 | 第73页 |
| ·总RNA提取与反转录 | 第73页 |
| ·bHLH基因克隆及测序 | 第73-74页 |
| ·bHLH基因片段PCR扩增 | 第73-74页 |
| ·3'RACE及5’Hi-TAIL PCR扩增 | 第74页 |
| ·bHLH基因全长扩增 | 第74页 |
| ·生物信息学分析 | 第74页 |
| ·实时定量表达分析 | 第74页 |
| ·DkLAR与DkANR启动子克隆 | 第74-75页 |
| ·DkLAR与DkANR启动子序列分析 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-81页 |
| ·DkMYC1基因的克隆 | 第75-76页 |
| ·DkMYC1序列分析 | 第76-78页 |
| ·DkMYC1基因的时空表达分析 | 第78-80页 |
| ·DkLAR与DkANR启动子序列克隆及分析 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-84页 |
| 5 柿WD40转录因子基因克隆、表达及功能分析 | 第84-99页 |
| ·前言 | 第84页 |
| ·试验材料 | 第84-85页 |
| ·本研究所用试材 | 第84页 |
| ·载体与菌株 | 第84页 |
| ·拟南芥材料 | 第84-85页 |
| ·试验方法 | 第85-89页 |
| ·总DNA提取 | 第85页 |
| ·总RNA提取与反转录 | 第85页 |
| ·DkWD40基因克隆及测序 | 第85-86页 |
| ·DkWD40基因片段PCR扩增 | 第85页 |
| ·3'RACE及5'Hi-TAIL PCR扩增 | 第85页 |
| ·DkWD40基因全长扩增 | 第85-86页 |
| ·生物信息学分析 | 第86页 |
| ·实时定量表达分析 | 第86页 |
| ·DkWD40超表达载体构建 | 第86-87页 |
| ·质粒提取 | 第86页 |
| ·DkWD40超表达载体构建 | 第86-87页 |
| ·根癌农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第87-89页 |
| ·根癌农杆菌感受态制备 | 第87-88页 |
| ·冻融法转化 | 第88页 |
| ·花侵染法转化拟南芥 | 第88-89页 |
| ·阳性单株筛选与鉴定 | 第89页 |
| ·结果与分析 | 第89-96页 |
| ·DkWD40基因的克隆 | 第89-91页 |
| ·DkWD40序列分析 | 第91-93页 |
| ·DkWD40的时空表达分析 | 第93-96页 |
| ·DkWD40基因转拟南芥鉴定功能 | 第96页 |
| ·讨论 | 第96-99页 |
| 6 柿果实乙醇脱涩处理后相关结构基因与转录因子基因表达分析 | 第99-105页 |
| ·前言 | 第99页 |
| ·材料与方法 | 第99-100页 |
| ·本研究所用试材 | 第99页 |
| ·柿离体果实乙醇脱涩处理 | 第99页 |
| ·可溶性及不溶性单宁含量测定 | 第99页 |
| ·单宁细胞形态观察 | 第99-100页 |
| ·实时定量表达分析 | 第100页 |
| ·结果与分析 | 第100-102页 |
| ·脱涩前后柿果实可溶性及不溶性单宁含量变化 | 第100页 |
| ·单宁细胞变化 | 第100-101页 |
| ·相关结构基因及转录因子基因表达分析 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102-105页 |
| 7 不完全涩柿‘华柿1号’的种质鉴定 | 第105-113页 |
| ·前言 | 第105页 |
| ·材料与方法 | 第105-107页 |
| ·本研究所有试材 | 第105-106页 |
| ·单宁细胞大小测定 | 第106页 |
| ·可溶性及不溶性单宁含量测定 | 第106页 |
| ·‘华柿1号’果实观察与统计 | 第106-107页 |
| ·结果与分析 | 第107-111页 |
| ·‘华柿1号’单宁细胞大小 | 第107页 |
| ·‘华柿1号’单宁含量测定结果 | 第107-108页 |
| ·‘华柿1号’果实观察与统计 | 第108-111页 |
| ·讨论 | 第111-113页 |
| 8 全文总结 | 第113-117页 |
| ·柿果实脱涩特点 | 第113-114页 |
| ·转录因子在柿单宁代谢中的作用 | 第114-116页 |
| ·进一步研究设想 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-139页 |
| 附录 | 第139-145页 |
| 附录Ⅰ 本研究所用实时定量引物序列 | 第139-140页 |
| 附录Ⅱ DkPA1基因扩增引物序列 | 第140页 |
| 附录Ⅲ DkMYC1基因扩增引物序列 | 第140-141页 |
| 附录Ⅳ DkWD40基因扩增引物序列 | 第141-142页 |
| 附录Ⅴ DkLAR与DkANR启动子序列 | 第142-144页 |
| 附录Ⅵ 攻读博士学位期间发表或待发表论文 | 第144-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |