| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-34页 |
| ·植物雄性不育研究概况 | 第13-19页 |
| ·植物雄性不育的分类 | 第13-14页 |
| ·植物雄性不育的表型 | 第14-15页 |
| ·雄性不育的分子机制 | 第15-19页 |
| ·差异表达基因的分离技术 | 第19-20页 |
| ·差别筛选 | 第19页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第19-20页 |
| ·cDNA-AFLP | 第20页 |
| ·基于差减杂交的克隆方法 | 第20-22页 |
| ·代表性差异分析 | 第20-21页 |
| ·抑制差减杂交 | 第21-22页 |
| ·抑制差减杂交技术 | 第22-25页 |
| ·SSH技术的基本原理 | 第22页 |
| ·SSH技术的主要步骤 | 第22-24页 |
| ·SSH技术的优缺点 | 第24页 |
| ·SSH技术在分离植物花发育差异表达基因中的应用 | 第24-25页 |
| ·植物核雄性不育相关基因的克隆方法 | 第25-28页 |
| ·图位克隆法 | 第25-26页 |
| ·转座子或T-DNA标签法 | 第26页 |
| ·同源序列克隆法 | 第26-27页 |
| ·mRNA差异表达基因发掘法 | 第27-28页 |
| ·植物基因功能验证的方法 | 第28-30页 |
| ·百日草遗传育种研究进展 | 第30-33页 |
| ·本研究的目的、意义和内容 | 第33-34页 |
| 2 百日草筒状花抑制消减CDNA文库的构建 | 第34-64页 |
| ·实验材料 | 第35-38页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·主要仪器与设备 | 第35-36页 |
| ·主要试剂和药品 | 第36页 |
| ·菌株和载体 | 第36-37页 |
| ·培养基和主要溶液的配制 | 第37-38页 |
| ·分子生物学软件及参考数据库 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-50页 |
| ·百日草RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第39-42页 |
| ·抑制消减杂交 | 第42-46页 |
| ·抑制消减杂交cDNA文库的构建 | 第46-47页 |
| ·斑点杂交筛选文库阳性克隆 | 第47-49页 |
| ·阳性克隆cDNA片段测序及序列分析 | 第49页 |
| ·差异表达基因的RT-PCR分析 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-60页 |
| ·百日草筒状花总RNA的检测 | 第50-51页 |
| ·抑制消减cDNA文库的构建 | 第51-58页 |
| ·差异表达片段的序列分析 | 第58页 |
| ·差异表达片段的功能分类 | 第58-59页 |
| ·差异表达基因的RT-PCR分析 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·抑制消减杂交文库的构建 | 第60-61页 |
| ·差异表达基因分析 | 第61-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 3 两个百日草花发育差异表达基因的克隆与序列分析 | 第64-80页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·植物材料 | 第65页 |
| ·百日草两个EST序列 | 第65页 |
| ·菌株和载体 | 第65页 |
| ·酶及化学试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器设备 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-68页 |
| ·引物的设计与合成 | 第65-66页 |
| ·扩增模板cDNA双链的制备 | 第66页 |
| ·RACE-PCR克隆基因的cDNA全长 | 第66页 |
| ·PCR产物的纯化回收、克隆和测序 | 第66-67页 |
| ·基因gDNA全长的获得 | 第67-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-78页 |
| ·ZeMYB35基因的克隆与序列分析 | 第68-74页 |
| ·ZeSTR基因的克隆与序列分析 | 第74-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 4 ZEMYB35基因转化烟草的研究 | 第80-90页 |
| ·实验材料 | 第80-81页 |
| ·植物材料 | 第80页 |
| ·菌株和载体 | 第80-81页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第81页 |
| ·转化烟草使用的培养基 | 第81页 |
| ·实验方法 | 第81-84页 |
| ·ZeMYB35两种表达载体的构建 | 第81-82页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第82-83页 |
| ·转基因烟草植株的PCR鉴定 | 第83-84页 |
| ·转基因烟草植株的形态观测 | 第84页 |
| ·转基因烟草的育性观测 | 第84页 |
| ·结果与分析 | 第84-88页 |
| ·两种表达载体的鉴定 | 第84-85页 |
| ·表达载体的农杆菌转化 | 第85-86页 |
| ·ZeMYB35基因转化烟草的鉴定 | 第86-88页 |
| ·讨论 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 5 全文总结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 附录 | 第105-121页 |
| 附录1 可育库中的差异表达基因 | 第105-109页 |
| 附录2 不育库中的差异表达基因 | 第109-114页 |
| 附录3 ZEMYB35基因cDNA与GDNA序列比较 | 第114-117页 |
| 附录4 ZESTR基因cDNA与GDNA序列比较 | 第117-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第122页 |