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赤霉菌侵染后小麦穗部表达蛋白的差示分析及钙网联蛋白基因的克隆研究

中文摘要第1-14页
英文摘要第14-16页
第一章 文献综述第16-38页
 一、蛋白质组学研究技术第16-27页
  (一) 样品制备第17-20页
   1、分步提取第18页
   2、特殊植物材料蛋白质样品制备第18-19页
   3、膜结合和疏水蛋白的提取第19页
   4、细胞器蛋白的提取第19页
   5、连续分步溶解第19-20页
  (二) 蛋白质分离技术第20-23页
   1、双向电泳第20-21页
   2、多维液相色谱第21-22页
   3、金属亲和迁移凝胶电泳第22页
   4、亲和色谱第22页
   5、固定化金属离子亲和色谱第22-23页
  (三) 蛋白质分析鉴定技术第23-25页
   1、质谱技术第23-24页
   2、蛋白质的N-端和C-端氨基酸序列分析第24-25页
  (四) 蛋白质组学中的生物信息学第25-27页
  (五) 蛋白质相互作用研究技术第27页
 二、蛋白质组学研究进展第27-36页
  (一) 蛋白质组学在遗传研究中的应用第27-29页
   1、多样性分析第27-28页
   2、突变体分析第28-29页
  (二) 蛋白质组学在发育生物学研究中的应用第29-31页
   1、不同组织/器官蛋白质组学研究第29-30页
   2、细胞器质蛋白质组学研究第30-31页
  (三) 植物非生物胁迫的蛋白质组学研究第31-33页
   1、冷害第31-32页
   2、干旱第32页
   3、高温第32页
   4、氧胁迫第32页
   5、盐胁迫第32页
   6、机械损伤第32-33页
   7、缺/低氧胁迫第33页
   8、臭氧胁迫第33页
   9、重金属离子胁迫第33页
  (四) 植物生长调控的蛋白质组学研究第33页
  (五) 植物与其它生物相互作用的蛋白质组学研究第33-34页
   1、真菌-植物相互作用第33-34页
   2、寄生虫-植物相互作用第34页
   3、病毒-植物相互作用第34页
   4、根瘤菌-植物相互作用第34页
  (六) 蛋白质组学在医学研究中的应用第34-36页
  (七) 蛋白质组学在药物开发研究中的应用第36页
 三、蛋白质组学研究的发展趋势和重要意义第36-38页
第二章 F.graminearum侵染后穗部表达蛋白的差异分析第38-53页
 引言第38-40页
 材料与方法第40-43页
  一、实验材料第40页
  二、仪器和试剂第40页
  三、接种和取样第40页
  四、蛋白质样品制备第40-41页
  五、蛋白质浓度测定第41页
  六、等电聚焦第41页
  七、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳第41-42页
  八、银染第42页
  九、图像扫描与分析第42页
  十、胶内酶解第42-43页
  十一、肽混合物的MALDI-TOFMS分析第43页
  十二、数据库检索第43页
  十三、染色体定位第43页
 结果与分析第43-51页
  一、F.graminearum侵染后不同时段小麦穗部蛋白的2-DE分析第43-45页
  二、差异蛋白质点的定量分析第45-46页
  三、差异蛋白质点的质谱分析与鉴定第46-49页
  四、差异表达蛋白基因的染色体定位第49-51页
 讨论第51-53页
第三章 小麦钙网联蛋白基因的克隆与功能分析第53-76页
 引言第53-55页
 材料与方法第55-60页
  一、实验材料第55页
  二、基因组DNA及总RNA的提取第55页
  三、RT-PCR和半定量RT-PCR第55-56页
  四、小麦钙网联蛋白的生物信息学分析第56页
  五、PA诱导的细胞程序性死亡及Trypan染色第56页
  六、PCR及PCR产物的克隆第56-57页
  七、TaCRT在大肠杆菌中的表达、纯化、酶切及SDS-PAGE第57-58页
  八、Ca~(2+)浓度测定及钙网联蛋白Ca~(2+)结合容量的测定第58页
  九、过量表达载体的构建和转化第58-59页
  十、农杆菌介导法烟草的遗传转化第59页
  十一、转基因烟草的PCR及GUS检测验证第59-60页
 结果与分析第60-74页
  一、小麦钙网联蛋白基因全长cDNA的克隆第60-64页
  二、钙网联蛋白在不同物种中的保守性分析第64-66页
  三、TaCRT的表达分析第66-67页
  四、TaCRT在细胞程序性死亡过程中的表达分析第67-68页
  五、TaCRT上游序列的分离第68-70页
  六、TaCRT的纯化及其Ca~(2+)结合能力第70-71页
  七、TaCRT的过量表达提高了烟草对花叶病毒抗性第71-74页
 讨论第74-76页
参考文献第76-95页
全文总结第95-96页
全文创新点第96-97页
发表文章情况第97-104页
致谢第104页

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