| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一部分 猪IFNα高密度发酵研究 | 第9-30页 |
| 第一章 综述 | 第9-16页 |
| 一、猪α干扰素研究进展 | 第9-11页 |
| 1、猪干扰素简介 | 第9页 |
| 2、猪α干扰素理化性质及结构特点 | 第9-10页 |
| 3、猪干扰素的基因工程 | 第10页 |
| 4、猪α干扰素实际应用及前景展望 | 第10-11页 |
| 二、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统概述 | 第11-15页 |
| 1、P.pastoris的生物学和遗传学特点 | 第12-13页 |
| 2、P.pastoris高效表达外源基因的机理及特点 | 第13-14页 |
| 3、P.pastoris在表达外源蛋白生产中的优势及广泛应用 | 第14-15页 |
| 三、高密度发酵 | 第15-16页 |
| 四、研究目的 | 第16页 |
| 第二章 实验研究 | 第16-30页 |
| 一、摇瓶发酵条件的优化 | 第16-21页 |
| 1、实验材料 | 第16-17页 |
| 2、实验方法 | 第17-18页 |
| ·试剂的配制 | 第17-18页 |
| ·摇瓶发酵及检测方法 | 第18页 |
| 3、实验结果 | 第18-20页 |
| ·诱导时间对重组P.pastoris表达猪IFNα的影响 | 第18页 |
| ·甲醇浓度对重组P.pastoris表达猪IFNα的影响 | 第18-19页 |
| ·pH值对重组P.pastoris表达猪IFNα的影响 | 第19-20页 |
| ·接种量对重组P.pastoris表达猪IFNα的影响 | 第20页 |
| 4、讨论分析 | 第20-21页 |
| 二、高密度发酵 | 第21-28页 |
| 1、实验材料 | 第21-22页 |
| 2、实验方法 | 第22-23页 |
| ·试剂的配制 | 第22页 |
| ·高密度发酵及检测方法 | 第22-23页 |
| 3、实验结果 | 第23-25页 |
| ·接种龄对重组菌株前期生长的影响 | 第23-24页 |
| ·甘油流加方式对工程菌生长的影响 | 第24页 |
| ·补料高密度发酵表达重组猪IFNα的结果 | 第24-25页 |
| 4、讨论与分析 | 第25-28页 |
| 三、参考文献 | 第28-30页 |
| 第二部分 两种鸡细胞因子的克隆 | 第30-51页 |
| 第一章 综述 | 第30-34页 |
| 一、细胞因子概述 | 第30-32页 |
| 1、细胞因子的概念及生物学功能 | 第30页 |
| 2、禽类细胞因子的研究意义 | 第30-31页 |
| 3、鸡细胞因子的研究进展 | 第31-32页 |
| 二、白细胞介素1 | 第32-33页 |
| 1、白细胞介素1的概念及生物学功能 | 第32页 |
| 2、鸡IL-1β的研究进展 | 第32-33页 |
| 三、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) | 第33-34页 |
| 1、GM-CSF的概念及生物学功能 | 第33页 |
| 2、鸡GM-CSF的研究进展 | 第33-34页 |
| 四、研究目的 | 第34页 |
| 第二章 实验研究 | 第34-51页 |
| 一、实验材料 | 第34页 |
| 二、实验方法 | 第34-39页 |
| 1、材料的处理与试剂的配制 | 第34-35页 |
| ·RNA提取相关用品的处理 | 第34页 |
| ·细胞培养相关用品的处理 | 第34-35页 |
| ·试剂的配制 | 第35页 |
| 2、鸡脾淋巴细胞的提取与培养 | 第35页 |
| 3、鸡脾淋巴细胞总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 4、RNA浓度的检测 | 第36页 |
| 5、目的基因的扩增 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR | 第37页 |
| 6、重组质粒T vector的构建及鉴定 | 第37-39页 |
| ·PCR产物的回收及纯化(根据试剂盒说明进行操作) | 第37-38页 |
| ·连接(根据试剂盒说明进行操作) | 第38页 |
| ·转化 | 第38页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| 7、基因拼接 | 第39页 |
| 三、实验结果 | 第39-49页 |
| 1、鸡IL-1β的克隆 | 第39-46页 |
| ·RNA的提取 | 第39页 |
| ·鸡IL-1β扩增及克隆鉴定 | 第39-40页 |
| ·鸡IL-1β的序列分析 | 第40-43页 |
| ·基因拼接 | 第43-44页 |
| ·XL寡核苷酸片段的获得 | 第43-44页 |
| ·讨论与分析 | 第44-46页 |
| 2、鸡GM-CSF的克隆 | 第46-49页 |
| ·RNA的提取 | 第46页 |
| ·鸡GM-CSF的扩增及克隆鉴定 | 第46页 |
| ·鸡GM-CSF的序列分析 | 第46-47页 |
| ·讨论与分析 | 第47-49页 |
| 四、参考文献 | 第49-51页 |
| 附录 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
