| 中文摘要 | 第1页 |
| 英文摘要 | 第4-8页 |
| 缩写 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 第Ⅰ部分 构建高比例全长cDNA文库制备白念珠菌基因芯片 | 第12-31页 |
| 一、实验材料与方法 | 第12-18页 |
| ·白念珠菌和生长条件 | 第12页 |
| ·药物和敏感性测定 | 第12页 |
| ·cDNA文库构建 | 第12-15页 |
| ·全长性检测 | 第15页 |
| ·质粒抽提和大规模测序 | 第15-16页 |
| ·生物信息学处理 | 第16页 |
| ·微阵列制备 | 第16页 |
| ·RNA提取和探针标记 | 第16-17页 |
| ·芯片杂交和质检 | 第17-18页 |
| 二、结果 | 第18-28页 |
| ·总RNA提取和mRNA分离 | 第18-19页 |
| ·LD-PCR产物分析 | 第19-20页 |
| ·cDNA片段分析 | 第20-21页 |
| ·库容量和重组率计算 | 第21页 |
| ·重组子插入片段长度分析 | 第21页 |
| ·全长cDNA鉴定 | 第21-22页 |
| ·EST序列归并 | 第22页 |
| ·基因组比较 | 第22-23页 |
| ·Unigene功能分类 | 第23-24页 |
| ·芯片杂交质量分析 | 第24-28页 |
| 三、讨论 | 第28-31页 |
| 第Ⅱ部分 利用基因芯片研究不同耐药机制白念珠菌的基因表达谱 | 第31-67页 |
| 一、实验材料与方法 | 第31-36页 |
| ·菌株和培养基 | 第31页 |
| ·药物和敏感性测定 | 第31-32页 |
| ·RNA提取和探针标记 | 第32页 |
| ·芯片杂交 | 第32页 |
| ·芯片检测和分析 | 第32-33页 |
| ·聚类分析 | 第33页 |
| ·cDNA合成和RT-PCR | 第33-36页 |
| 二、结果和讨论 | 第36-65页 |
| ·芯片杂交总体实验设计 | 第36-40页 |
| ·ABC转运蛋白和MFS转运蛋白家族基因 | 第40-44页 |
| ·耐药相关基因的DRE元件及TAC1与DRE的相互作用 | 第44-47页 |
| ·氧化应激相关基因和线粒体功能 | 第47-51页 |
| ·铜、铁离子转运和动员相关基因 | 第51-55页 |
| ·形态和毒力相关基因 | 第55-63页 |
| ·聚类分析 | 第63-65页 |
| 三、小结 | 第65-67页 |
| 第Ⅲ部分 耐药相关全长新基因的克隆和生物信息学分析 | 第67-81页 |
| 一、实验材料与方法 | 第67页 |
| ·白念珠菌株和培养基 | 第67页 |
| ·DNA测序和Walking | 第67页 |
| ·CaHXT10和CaFDH12的克隆 | 第67页 |
| ·生物信息学分析 | 第67页 |
| 二、结果 | 第67-80页 |
| ·全长基因的获取 | 第67-69页 |
| ·CaHXT10和CaFDH12的核酸结构和染色体定位分析 | 第69-74页 |
| ·CaHXT10和CaFDH12的蛋白质序列分析 | 第74-78页 |
| ·全长新基因进化树亲缘分析 | 第78-79页 |
| ·全长新基因的芯片数据分析 | 第79-80页 |
| 三、讨论 | 第80-81页 |
| 第Ⅳ部分 全长新基因CaHXT10和CaFDH12的功能鉴定 | 第81-110页 |
| 一、实验材料与方法 | 第81-92页 |
| ·CaHXT10和CaFDH12高表达载体的构建 | 第81-83页 |
| ·DNA测序和序列分析 | 第83页 |
| ·白念珠菌高表达株和生长条件 | 第83-84页 |
| ·白念珠菌转化 | 第84-85页 |
| ·RNA提取 | 第85页 |
| ·cDNA合成和逆转录PCR(RT-PCR) | 第85-86页 |
| ·实时荧光定量PCR(RealTime-PCR) | 第86-88页 |
| ·SDS-PAGE变性凝胶电泳 | 第88-89页 |
| ·微量液基稀释法测定药物敏感性 | 第89-90页 |
| ·琼脂平板抑菌圈实验 | 第90页 |
| ·时间生长曲线研究 | 第90页 |
| ·流式细胞术测定细胞周期 | 第90-91页 |
| ·细胞形态观察 | 第91页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察 | 第91-92页 |
| ·Rhodamine 6G的荧光外排实验 | 第92页 |
| ·体内毒力研究 | 第92页 |
| 二、结果 | 第92-108页 |
| ·高表达载体的构建并确证 | 第92页 |
| ·高表达菌株的构建并确证 | 第92-94页 |
| ·CAI4-HXT10和CAI4-FDH12高表达菌的药物敏感性 | 第94-97页 |
| ·CaFDH12和CaHXT10基因高表达对白念珠菌生长曲线的影响 | 第97-98页 |
| ·CaFDH12基因高表达对细胞周期的影响 | 第98-100页 |
| ·CaFDH12和CaHXT10基因高表达对罗丹明的摄取和外排作用 | 第100-101页 |
| ·CaFDH12和CaHXT10基因高表达对白念珠菌菌丝形成的影响 | 第101-102页 |
| ·CaFDH12和CaHXT10基因高表达对白念珠菌生物膜形成的影响 | 第102-106页 |
| ·CAI4-FDH12和CAI4-HXT10高表达菌对小鼠的体内毒力实验 | 第106-108页 |
| 三、讨论 | 第108-110页 |
| 总结 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-125页 |
| 附录：综述一、二 | 第125-146页 |
| 发表文章 | 第146-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
