| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| Ⅰ 引 言 | 第15-16页 |
| Ⅱ 文献综述 | 第16-39页 |
| 1 马铃薯生产现状 | 第16-17页 |
| ·国外马铃薯生产现状 | 第16页 |
| ·中国马铃薯生产现状 | 第16-17页 |
| ·马铃薯加工业发展状况 | 第17页 |
| 2 基因工程技术在马铃薯育种中的应用 | 第17-20页 |
| ·马铃薯抗病毒病基因工程 | 第18页 |
| ·马铃薯抗菌基因工程 | 第18-19页 |
| ·马铃薯抗虫基因工程 | 第19页 |
| ·马铃薯抗除草剂基因工程 | 第19-20页 |
| ·马铃薯品质改良基因工程 | 第20页 |
| 3 马铃薯低温糖化现象及研究进展 | 第20-28页 |
| ·马铃薯低温糖化现象 | 第20-21页 |
| ·马铃薯低温糖化的生理生化研究进展 | 第21-23页 |
| ·低温改变了碳水化合物代谢途径中酶的活性 | 第21-23页 |
| ·低温对造粉体膜的影响 | 第23页 |
| ·马铃薯低温糖化生化机制 | 第23-28页 |
| ·UGPase的研究和应用 | 第24-26页 |
| ·UGPase的定位 | 第25页 |
| ·UGPase的酶学 | 第25页 |
| ·UGPase的分子生物学 | 第25-26页 |
| ·UGPase在马铃薯块茎冷糖化研究中的利用 | 第26页 |
| ·AcInV的研究和应用 | 第26-28页 |
| ·AcInV的功能 | 第26页 |
| ·AcInV的定位 | 第26-27页 |
| ·AcInV的酶学 | 第27页 |
| ·AcInV的分子生物学 | 第27页 |
| ·AcInV的研究和应用 | 第27-28页 |
| 4 反义RNA技术 | 第28-32页 |
| ·反义RNA的发现 | 第28-29页 |
| ·自然界中存在的反义RNA | 第28-29页 |
| ·反义RNA技术作用原理 | 第29页 |
| ·反义RNA技术在植物学中的应用 | 第29-32页 |
| ·反义RHA技术在植物基因功能及植物生理代谢途径研究中的应用 | 第29-30页 |
| ·反义RNA技术在植物基因工程中的应用 | 第30-32页 |
| ·在作物品质改良中的应用 | 第30-31页 |
| ·在植物抗病研究中的应用 | 第31-32页 |
| ·在植物雄性不育及其育性恢复研究中的应用 | 第32页 |
| ·在其他方面的应用 | 第32页 |
| 5 转化外源基因的表达调控 | 第32-36页 |
| ·植物基因工程操作启动子研究 | 第33-36页 |
| ·启动子调控基因表达的发现及类型 | 第33-36页 |
| ·组成型启动子 | 第33-34页 |
| ·组织特异性启动子 | 第34页 |
| ·诱导性启动子 | 第34-36页 |
| ·激素诱导性启动子 | 第34页 |
| ·创伤诱导性启动子 | 第34页 |
| ·真菌诱导性启动子 | 第34-35页 |
| ·低温、干旱和盐胁迫诱导性启动子 | 第35-36页 |
| ·低温诱导性启动子的调控机理 | 第35-36页 |
| 6 植物遗传转化技术在马铃薯基因工程中的应用 | 第36-37页 |
| ·基因枪技术在植物遗传转化中的应用 | 第36页 |
| ·农杆菌介导遗传转化技术在马铃薯基因工程中的研究 | 第36-37页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 8 实验技术路线 | 第38-39页 |
| Ⅲ 实验材料及方法 | 第39-52页 |
| 1 材料 | 第39-40页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·菌种和质粒 | 第39页 |
| ·工具酶和试剂 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·细菌培养基 | 第39页 |
| ·植物组织培养基 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-43页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第40页 |
| ·小量碱法提取质粒 | 第40-41页 |
| ·根癌农杆菌质粒的制备 | 第41-42页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的转化 | 第41-42页 |
| ·农杆菌Ti质粒DNA碱法小量提取 | 第42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第42-43页 |
| 3 基因克隆 | 第43-49页 |
| ·拟南芥菜(Ａrabidopsis)rd29A基因启动子片段的克隆 | 第43-45页 |
| ·拟南芥菜(Ａrabidopsis)基因组DNA的提取方法 | 第43-44页 |
| ·PCR扩增rd29A 启动子片段 | 第44页 |
| ·PCR引物设计 | 第44页 |
| ·PCR反应体系 | 第44页 |
| ·rd29A启动子重组克隆的篮白斑筛选 | 第44-45页 |
| ·目的片段与T载体的连接反应 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的篮白斑筛选实验 | 第45页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第45页 |
| ·AcInV基因的克隆 | 第45-48页 |
| ·马铃薯块茎总RNA的提取 | 第45-46页 |
| ·First-Strand cDNA 合成 | 第46-47页 |
| ·PCR扩增 AcInV 基因 | 第47页 |
| ·PCR引物设计 | 第47页 |
| ·PCR扩增反应体系 | 第47页 |
| ·PCR扩增反应程序 | 第47页 |
| ·AcInV 基因小片断(300bp)的克隆 | 第47-48页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)基因的亚克隆 | 第48-49页 |
| 4 植物表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·rd29A启动子及CaM 35S启动子驱动的GFP基因的植物表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·rd29A启动子及CaM 35S启动子驱动的不同大小片段AcInV 基因反义植物载体构建 | 第50-51页 |
| 5 植物表达载体转化根癌农杆菌 | 第51页 |
| 6 基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第51-52页 |
| ·钨粉-DNA复合体的制备 | 第51页 |
| ·受体材料的预处理 | 第51页 |
| ·受体材料的轰击 | 第51-52页 |
| ·受体材料的后处理 | 第52页 |
| Ⅳ 结果与分析 | 第52-69页 |
| 1 rd29A 低温诱导性启动子片段的克隆及其功能分析 | 第52-57页 |
| ·拟南芥菜(Ａrabidopsis)rd29A基因启动子片段的克隆 | 第52-54页 |
| ·拟南芥菜(Ａrabidopsis)基因组DNA的提取和琼脂糖凝胶电泳检测 | 第52页 |
| ·rd29A启动子DNA片段的克隆及序列分析 | 第52-54页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)基因的亚克隆 | 第54-55页 |
| ·GFP基因的克隆及序列分析 | 第54-55页 |
| ·rd29A 启动子及CaM 35S启动子驱动的GFP基因植物表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·CaM 35S启动子驱动的GFP基因植物表达载体的构建及检测 | 第55页 |
| ·rd29A 启动子驱动的GFP基因植物表达载体的构建及检测 | 第55-56页 |
| ·rd29A启动子片段活性分析 | 第56-57页 |
| 2 AcInV基因的克隆及其反义植物表达载体的构建 | 第57-61页 |
| ·AcInV基因的克隆 | 第57-60页 |
| ·马铃薯块茎组织总RNA的提取和琼脂糖凝胶电泳检测 | 第57页 |
| ·AcInV基因的克隆及序列分析 | 第57-60页 |
| ·AcInV 基因小片段(300bp)的克隆 | 第60页 |
| ·AcInV基因反义植物表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·CaMV 35S启动子驱动的AcInV基因植物表达载体pBIAC的构建及检测 | 第60-61页 |
| ·rd29A启动子驱动的AcInV基因植物表达载体pBIRDAC、pBIRDAC300的构建及检测 | 第61页 |
| 3 植物表达载体pBIAC、pBIRDAC、pBIRDAC300转化根癌农杆菌 | 第61-62页 |
| 4 根癌农杆菌介导法对马铃薯反义AcInV基因导入马铃薯的遗传转化研究 | 第62-69页 |
| ·农杆菌工程菌转化外植体的方法 | 第62页 |
| ·马铃薯组培苗的复壮 | 第62页 |
| ·农杆菌工程菌菌液的准备 | 第62页 |
| ·外植体的预培养 | 第62页 |
| ·农杆菌转化的方法 | 第62页 |
| ·马铃薯遗传转化再生体系的建立 | 第62-63页 |
| ·茎段和叶片的再生 | 第62-63页 |
| ·遗传转化体系的优化 | 第63页 |
| ·农杆菌浓度及浸染时间对遗传转化的影响 | 第63页 |
| ·预培养时间对遗传转化的影响 | 第63页 |
| ·共培养时间对遗传转化的影响 | 第63页 |
| ·受体材料的Kan敏感性鉴定 | 第63页 |
| ·抗生素Cb与Cef对受体培养过程中农杆菌的抑制效果的研究 | 第63页 |
| ·AgNO3 对马铃薯外植体褐化的抑制作用研究 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-69页 |
| ·马铃薯再生体系的建立 | 第63-65页 |
| ·茎段、叶片愈伤组织的发生 | 第63-65页 |
| ·遗传转化体系的优化 | 第65-69页 |
| ·农杆菌浓度及感染时间对遗传转化的影响 | 第65页 |
| ·预培养时间对遗传转化的影响 | 第65-66页 |
| ·共培养时间对遗传转化的影响 | 第66页 |
| ·受体材料的Kan敏感性鉴定 | 第66-67页 |
| ·抗生素Cb与Cef对受体培养过程中农杆菌的抑制效果及对遗传转化的影响 | 第67-68页 |
| ·转化受体培养中褐化的抑制 | 第68-69页 |
| Ⅴ 讨论 | 第69-72页 |
| Ⅵ 结论 | 第72-74页 |
| Ⅶ 参考文献 | 第74-84页 |
| Ⅷ 图 版 | 第84-85页 |
| Ⅸ 致 谢 | 第85页 |
