| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-26页 |
| ·骨髓间充质干细胞 | 第15-20页 |
| ·定义、分类及来源 | 第15页 |
| ·BMSCs的分离方法和形态学特征 | 第15-16页 |
| ·BMSCs的表面标志及细胞因子的表达 | 第16页 |
| ·BMSCs的生物学特性 | 第16-17页 |
| ·BMSCs向神经细胞分化 | 第17页 |
| ·BMSCs在神经组织中的迁移及机制 | 第17-19页 |
| ·BMSCs作为基因载体治疗胶质瘤的优势 | 第19-20页 |
| ·胞嘧啶脱氨酶基因 | 第20-22页 |
| ·定义及特征 | 第20页 |
| ·临床应用进展及存在的问题 | 第20-22页 |
| ·胞嘧啶脱氨酶基因与胶质瘤的临床治疗 | 第22-24页 |
| ·临床应用价值 | 第22-23页 |
| ·研究现状及存在的问题 | 第23-24页 |
| ·本文的选题依据和研究内容 | 第24-26页 |
| 2 pIRES2-AcGFP1-CD真核表达载体的构建及其在兔BMSCs中的表达 | 第26-39页 |
| ·引言 | 第26-27页 |
| ·实验仪器与材料 | 第27-28页 |
| ·实验仪器与设备 | 第27页 |
| ·药品与试剂 | 第27-28页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-30页 |
| ·CD基因的克隆 | 第28页 |
| ·PCR引物的设计合成 | 第28页 |
| ·大肠杆菌JM109基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·目的基因片段CD基因的合成 | 第28-29页 |
| ·pMD19-T-CD克隆载体的构建 | 第29页 |
| ·CD基因序列分析 | 第29页 |
| ·pIRES2-AcGFP1-CD真核表达质粒的构建 | 第29页 |
| ·pIRES2-AcGFP1-CD的扩增与鉴定 | 第29页 |
| ·pIRES2-AcGFP1-CD重组质粒的纯化 | 第29页 |
| ·兔骨髓间充质干细胞取材、培养 | 第29页 |
| ·兔骨髓间充质干细胞的鉴定 | 第29-30页 |
| ·脂质体介导法将CD基因转染兔骨髓间充质干细胞 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-36页 |
| ·CD基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·CD基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·CD基因的序列分析 | 第32页 |
| ·pIRES2-AcGFP1-CD真核表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·兔骨髓间充质干细胞的原代及传代培养 | 第33-34页 |
| ·兔骨髓间充质干细胞的鉴定 | 第34-36页 |
| ·绿色荧光蛋白表达的观察 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 3 脂质体及慢病毒介导CD基因转染小鼠BMSCs | 第39-62页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验仪器与材料 | 第39-41页 |
| ·实验仪器与设备 | 第39-40页 |
| ·药品与试剂 | 第40-41页 |
| ·实验动物 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-45页 |
| ·质粒的扩增、提取与鉴定 | 第41页 |
| ·小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定 | 第41页 |
| ·CD基因的转染 | 第41-42页 |
| ·Bcl2慢病毒包装 | 第42页 |
| ·质粒抽提 | 第42页 |
| ·慢病毒包装 | 第42页 |
| ·CD慢病毒载体构建 | 第42-43页 |
| ·attB1-CD-attB2基因片断的获得 | 第42页 |
| ·BP结合反应-构建pDOWN-CD载体 | 第42-43页 |
| ·pDOWN-CD载体的转化和检测 | 第43页 |
| ·LR结合反应-构建pLV/EXPN2-Puro-PGK-CD表达载体 | 第43页 |
| ·pLV/EXPN2-Puro-PGK-CD表达载体的转化和检测 | 第43页 |
| ·CD基因RT-PCR检测 | 第43-45页 |
| ·RNA抽提 | 第43-44页 |
| ·第一条cDNA链的合成 | 第44-45页 |
| ·PCR反应 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-58页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·小鼠骨髓间充质干细胞的形态观察与表面标记表达 | 第46-47页 |
| ·细胞转染后CD基因的表达 | 第47-48页 |
| ·Puromycin浓度的选取 | 第48页 |
| ·G418浓度的选取 | 第48-49页 |
| ·携带eGFP慢病毒转导C57小鼠骨髓间充质干细胞 | 第49-51页 |
| ·携带CD慢病毒转导C57小鼠骨髓间充质干细胞 | 第51-52页 |
| ·BMSCs-CD/eGFP的负筛选 | 第52-57页 |
| ·扩增后的细胞形态 | 第57页 |
| ·RNA样品分析 | 第57页 |
| ·RT-PCR结果 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| ·小结 | 第60-62页 |
| 4 转染CD基因的BMSCs对大鼠C6胶质瘤细胞体外抑制作用研究 | 第62-73页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·实验仪器与材料 | 第62-63页 |
| ·实验仪器与设备 | 第62-63页 |
| ·药品与试剂 | 第63页 |
| ·实验动物 | 第63页 |
| ·试验方法 | 第63-65页 |
| ·C6胶质瘤细胞的传代培养 | 第63页 |
| ·BMSCs的培养 | 第63页 |
| ·BMSCs-CD/eGFP细胞的传代培养 | 第63-64页 |
| ·CD基因的RT-PCR鉴定 | 第64页 |
| ·小鼠骨髓间充质干细胞的鉴定 | 第64-65页 |
| ·C6胶质瘤细胞与BMSCs-CD/eGFP细胞Transwell板上共培养 | 第65页 |
| ·培养液中加5-FC后流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡 | 第65页 |
| ·结果 | 第65-70页 |
| ·C6胶质瘤细胞的传代培养 | 第65-66页 |
| ·小鼠BMSCs的培养 | 第66页 |
| ·CD基因的RT-PCR鉴定 | 第66-67页 |
| ·小鼠BMSCs表型鉴定 | 第67-68页 |
| ·流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞凋亡 | 第68-69页 |
| ·小鼠BMSCs成脂及成骨诱导分化鉴定 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 5 转染CD基因的BMSCs对大鼠C6胶质瘤细胞体内抑制作用研究 | 第73-89页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·实验仪器与材料 | 第73-74页 |
| ·实验仪器与设备 | 第73页 |
| ·药品与试剂 | 第73页 |
| ·实验动物 | 第73-74页 |
| ·试验方法 | 第74-76页 |
| ·C6胶质瘤细胞的传代培养 | 第74页 |
| ·BMSCs-CD/eGFP细胞的传代培养 | 第74页 |
| ·大鼠C6胶质瘤与BMSCs-CD/eGFP细胞共同移植C6大鼠脑内 | 第74-75页 |
| ·动物模型腹腔注射5-FC | 第75页 |
| ·大鼠行为状态观察 | 第75页 |
| ·动物模型动态MRI监测 | 第75页 |
| ·RT-PCR法检测CD mRNA的表达 | 第75-76页 |
| ·HE染色病理组织形态学观察 | 第76页 |
| ·TUNEL法检测胶质瘤细胞的凋亡 | 第76页 |
| ·结果 | 第76-85页 |
| ·动物模型一般状态及存活期观察 | 第76-79页 |
| ·MRI监测大鼠肿瘤体积的动态演变 | 第79-81页 |
| ·大鼠脑胶质瘤模型的生长抑制率 | 第81-82页 |
| ·RT-PCR检测脑胶质瘤模型肿瘤组织中CD mRNA的表达 | 第82-83页 |
| ·肿瘤组织病理形态组织学观察 | 第83-84页 |
| ·荧光显微镜下观察BMSCs-CD/eGFP的分布 | 第84页 |
| ·TUNEL检测动物模型的肿瘤细胞凋亡 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| ·小结 | 第87-89页 |
| 结论 | 第89-91页 |
| 工作展望 | 第91-92页 |
| 创新点摘要 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-106页 |
| 附录A 英文缩略词 | 第106-107页 |
| 附录B 体内试验图片资料 | 第107-113页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
| 作者简介 | 第117-118页 |
