| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-16页 |
| 1.DNA疫苗的研究进展 | 第9-13页 |
| ·DNA疫苗的优点 | 第9-10页 |
| ·肌肉注射的研究机理 | 第10-12页 |
| ·肌细胞对质粒DNA表达载体的摄取机理 | 第10-11页 |
| ·肌细胞对外源DNA的持续表达 | 第11页 |
| ·肌注途径中外源基因表达产物的提呈机理 | 第11-12页 |
| ·影响核酸免疫效果的主要因素 | 第12-13页 |
| ·目的基因的选择 | 第12页 |
| ·载体质粒及启动子的选择 | 第12页 |
| ·接种方法和途径 | 第12页 |
| ·接种部位的预处理 | 第12-13页 |
| ·接种剂量和次数 | 第13页 |
| ·增强剂和佐剂的应用 | 第13页 |
| ·实验动物年龄和品系的影响 | 第13页 |
| 2 SARS病毒S蛋白简介 | 第13-15页 |
| ·SARS病毒简介 | 第13-14页 |
| ·S蛋白 | 第14-15页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 材料与方法 | 第16-30页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第16-22页 |
| ·菌种、载体和质粒 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16-17页 |
| ·溶液的配制 | 第17-22页 |
| ·质粒抽提主要试剂 | 第17-18页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第18页 |
| ·培养基及相关试剂 | 第18-19页 |
| ·SDS-PAGE试剂 | 第19-20页 |
| ·免疫印迹(Western blotting)用液 | 第20-21页 |
| ·ELISA用液 | 第21-22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·主要设备和仪器 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-30页 |
| ·生物信息学分析确定抗SARS病毒DNA疫苗基因片段 | 第22-23页 |
| ·SARS冠状病毒S蛋白结构分析 | 第22-23页 |
| ·生物信息学分析及片段选取 | 第23页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·重组质粒pGEX-5X-Sc的构建、转化和酶切鉴定 | 第23-25页 |
| ·原核融合表达载体pGEX-5X-1和外源片段的准备 | 第23页 |
| ·用DNA Extraction Kit从琼脂糖凝胶中回收载体和外源DNA片段 | 第23-24页 |
| ·载体和外源片段的连接 | 第24页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态制备 | 第24页 |
| ·转化 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第25页 |
| ·重组质粒pGEX-5X-Sc在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第25-26页 |
| ·制备大肠杆菌DE3的感受态细胞 | 第25页 |
| ·重组质粒pGEX-5X-Sc的转化 | 第25页 |
| ·收获重组质粒pGEX-5X-Sc的大量表达产物 | 第25页 |
| ·表达产物的纯化 | 第25页 |
| ·表达产物的免疫印迹分析 | 第25-26页 |
| ·重组真核表达质粒pcDNA3.1-Sc的构建、转化和酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·pcDNA3.1(-)载体和外源片段的准备和纯化 | 第26-27页 |
| ·pcDNA3.1(-)载体与Sc外源片段的连接 | 第27页 |
| ·转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第27页 |
| ·pcDNA3.1-Sc质粒DNA免疫小鼠诱导的免疫应答 | 第27-30页 |
| ·质粒大量制备 | 第27-28页 |
| ·免疫接种小鼠 | 第28-29页 |
| ·血清中Sc-IgG含量测定 | 第29页 |
| ·PCR测注射部位肌肉组织的质粒分布 | 第29页 |
| ·CD~(4+)、CD~(8+)T细胞亚群含量测定 | 第29-30页 |
| 结果和分析 | 第30-40页 |
| 1 生物信息学分析结果 | 第30-31页 |
| 2 重组质粒pGEX-5X-Sc的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| 3 重组质粒pGEX-5X-Sc的诱导表达、纯化和SDS-PAGE | 第32-33页 |
| 4 重组蛋白的Western Blotting鉴定 | 第33-35页 |
| 5 重组真核表达质粒pcDNA3.1-Sc的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| 6 SARS-CoV S蛋白的特异性IgG ELISA结果 | 第36-37页 |
| 7 血清中淋巴细胞表型的变化 | 第37-39页 |
| 8 半定量PCR测注射部位肌肉组织的质粒分布 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-54页 |
| 附录(硕士期间发表的文章) | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
