| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 植物抗真菌蛋白的分离及基因克隆的研究进展 | 第12-20页 |
| ·几丁质酶 | 第12-14页 |
| ·β-1,3 葡聚糖酶 | 第14-16页 |
| ·核糖体失活蛋白 | 第16-17页 |
| ·其它抗真菌蛋白 | 第17-20页 |
| ·天麻抗真菌蛋白 | 第17页 |
| ·杜仲抗真菌蛋白 | 第17-18页 |
| ·萝卜抗真菌蛋白 | 第18-19页 |
| ·水稻抗真菌蛋白 | 第19页 |
| ·橡胶蛋白 | 第19-20页 |
| 2 绿色荧光蛋白(GFP)基因作为标记基因研究进展 | 第20-22页 |
| 3 短小芽孢杆菌是真核基因表达的良好宿主菌 | 第22-24页 |
| 4 转座插入突变在基因功能分析上的应用现状 | 第24-26页 |
| 第一章 绿色荧光蛋白(GFP)基因在短小芽孢杆菌中的组成型表达研究 | 第26-45页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要的仪器和设备 | 第27-29页 |
| 2 方法 | 第29-38页 |
| ·细菌培养条件 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第29页 |
| ·大肠杆菌小量质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·质粒的酶切反应 | 第30页 |
| ·酶切产物的回收与连接 | 第30-31页 |
| ·线性化载体去磷酸化反应 | 第31页 |
| ·短小芽孢杆菌的电击转化 | 第31-32页 |
| ·短小芽孢杆菌 DX01 菌株基因组 DNA 的提取 | 第32页 |
| ·短小芽孢杆菌 DX01 菌株质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·短小芽孢杆菌组成型启动子活性片段 F1 的亚克隆 | 第33页 |
| ·短小芽孢杆菌 gfp 基因组成型表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·荧光检测 | 第34页 |
| ·短小芽孢杆菌 GFP 阳性菌总蛋白的 SDS-PAGE 电泳 | 第34页 |
| ·短小芽孢杆菌 GFP 表达的免疫印迹检测 | 第34-36页 |
| ·GFP 蛋白表达的荧光激活细胞分检分析 | 第36-37页 |
| ·表达 gfp 基因的短小芽孢杆菌工程菌在水稻上的示踪分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-45页 |
| ·短小芽孢杆菌 DX01 启动子 pCP01 功能片段 F1 的亚克隆 | 第38-39页 |
| ·pUC118-F1gfp 和 pHY300-F1gfp 原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·含表达载体 pUC118-F1gfp 的大肠杆菌荧光检测 | 第40页 |
| ·含表达载体 pHY300-F1gfp 的短小芽孢杆菌荧光检测 | 第40-41页 |
| ·短小芽孢杆菌 GFP 组成型表达的 Western-blotting 鉴定 | 第41-42页 |
| ·gfp 基因表达的流式细胞仪荧光激活细胞分检分析 | 第42-43页 |
| ·gfp 标记的短小芽孢杆菌在土壤中的示踪 | 第43-44页 |
| ·gfp 标记的短小芽孢杆菌在水稻叶片上的示踪 | 第44-45页 |
| 第二章 MuA 转座酶介导的启动子 F1 随机插入突变的研究 | 第45-60页 |
| 1 材料与方法 | 第45-54页 |
| ·材料 | 第45-48页 |
| ·菌株和载体 | 第45-46页 |
| ·试剂和酶制剂 | 第46-48页 |
| ·方法 | 第48-54页 |
| ·PCR 亚克隆组成型启动子 F | 第148-48页 |
| ·启动子活性片段 F1 随机插入突变 | 第48-50页 |
| ·F1 随机插入突变 Cm 抗性水平的测定 | 第50-51页 |
| ·含 ECE7-FmX 突变体的大肠杆菌 CAT-ELISA 测定 | 第51-52页 |
| ·短小芽孢杆菌 DX01 表达载体 pHY300-FmX' gAFP 的构建 | 第52-54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-60页 |
| ·启动子活性片段 F1 随机插入突变 | 第54-55页 |
| ·F1 随机插入突变体 Cm 抗性水平及 CAT 合成量的测定 | 第55-56页 |
| ·系列载体的酶切验证 | 第56-57页 |
| ·增强的突变启动子调控下的 gfp 基因在 DX01 中的表达 | 第57-60页 |
| 第三章 萝卜抗真菌蛋白 1(Rs-AFP1)基因在大肠杆菌中的融合表达研究 | 第60-79页 |
| 1 材料 | 第61页 |
| ·萝卜品种 | 第61页 |
| ·真菌菌种 | 第61页 |
| ·细菌与载体 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61-72页 |
| ·萝卜种子培养条件 | 第61页 |
| ·真菌培养条件 | 第61-62页 |
| ·萝卜幼苗总 DNA 抽提方法 | 第62页 |
| ·萝卜幼苗总 RNA 的提取 | 第62-63页 |
| ·RNA 提取过程中的注意事项 | 第62-63页 |
| ·提取方法 | 第63页 |
| ·萝卜抗真菌蛋白 1(Rs-AFP1)基因的 PCR 克隆 | 第63页 |
| ·Rs-afp1 cDNA 第一链的合成 | 第63-64页 |
| ·RT-PCR 扩增 Rs-afp1 cDNA | 第64页 |
| ·表达载体 pUC118-F1SPAFP 的构建 | 第64-65页 |
| ·含信号肽和 T7 终止子的 AFP 系列表达载体构建 | 第65-67页 |
| ·表达载体 pUC118-F1SP'AFP 的构建 | 第67-68页 |
| ·表达载体 pUC118-F1SP'Agfp 的构建 | 第68-69页 |
| ·表达载体 pHY300-F1SP'Agfp 的构建 | 第69-71页 |
| ·工程菌活性鉴定 | 第71-72页 |
| 3 结果与讨论 | 第72-77页 |
| ·Rs-afp1 基因的 PCR 克隆和其 cDNA 片段的 RT-PCR | 第72-74页 |
| ·DX01 菌对病原真菌的拮抗作用 | 第74页 |
| ·工程菌拮抗真菌活性测定 | 第74-75页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中表达的分子检测 | 第75-77页 |
| 附录部分文献综述--RAPD 分子标记在植物遗传育种中的应用 | 第77-79页 |
| 1 RAPD | 第77-78页 |
| 2 DAF | 第78页 |
| 3 AP-PCR | 第78-79页 |
| 第四章 利用 RAPD 技术推测杂交落羽杉群落间的亲缘关系 | 第79-93页 |
| 1 材料 | 第80页 |
| 2 方法 | 第80-82页 |
| ·落羽杉和柳杉的基因组总 DNA 的提取 | 第80-81页 |
| ·随机引物 | 第81页 |
| ·RAPD-PCR 反应 | 第81页 |
| ·统计分析 | 第81-82页 |
| 3 结果与分析 | 第82-91页 |
| ·不同引物对供试样本的扩增效率 | 第82页 |
| ·杂交墨西哥落羽杉的母本及柳杉的带型特征 | 第82-84页 |
| ·样本间的遗传距离及亲缘关系分析 | 第84-87页 |
| ·八个片林样本的 RAPD 鉴定结果分析 | 第87-91页 |
| 4 讨论 | 第91-93页 |
| ·关于柳杉基因组总 DNA 的提取 | 第91页 |
| ·关于 RAPD 反应体系的优化 | 第91页 |
| ·RAPD 技术用于杉科植物亲缘关系鉴定的可行性 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
