| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1. 前言 | 第10-20页 |
| ·甜菜夜蛾 | 第10-12页 |
| ·甜菜夜蛾危害情况 | 第10-11页 |
| ·甜菜夜蛾防治现状 | 第11页 |
| ·甜菜夜蛾的生物学研究进展 | 第11-12页 |
| ·中肠围食膜概述 | 第12-15页 |
| ·中肠围食膜结构 | 第12-14页 |
| ·围食膜的重要性 | 第14-15页 |
| ·甜菜夜蛾肠粘蛋白 | 第15-16页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统 | 第16-18页 |
| ·RNA 干扰简述 | 第18-20页 |
| 2. 材料与方法 | 第20-33页 |
| ·供试昆虫 | 第20页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·试剂及仪器 | 第20-23页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·所购试剂 | 第20-21页 |
| ·酶与生化试剂 | 第21页 |
| ·溶液的配制 | 第21-23页 |
| ·常用仪器设备 | 第23页 |
| ·SeIIM8 序列分析 | 第23页 |
| ·SeIIM8 的真核表达 | 第23-27页 |
| ·seIIm8 基因克隆至pFast1 构建pFast-IIm8 | 第23-24页 |
| ·将pFast-IIm8 转化入DH5α感受态 | 第24页 |
| ·CTAB 法提取pFast-IIm8 | 第24-25页 |
| ·酶切及PCR 验证pFast-IIm8 | 第25-26页 |
| ·将验证正确的pFast-IIm8 转化入DH108ac | 第26页 |
| ·提取重组子Bac-IIm8 | 第26页 |
| ·PCR 验证Bac-IIm8 | 第26-27页 |
| ·转染BTI-TN-5B1-4（HighFive）细胞获得重组蛋白 | 第27-28页 |
| ·准备处于对数生长期的BTI-TN-5B1-4（HighFive）细胞 | 第27页 |
| ·将验证正确的bacmid 转染BTI-TN-5B1-4（HighFive） | 第27-28页 |
| ·收集颗粒体状病毒 | 第28页 |
| ·扩大转染 | 第28页 |
| ·检测SeIIM8 蛋白的表达 | 第28-29页 |
| ·特异抗体的制备 | 第28页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·蛋白质免疫印迹分析 | 第29页 |
| ·SeIIM8 蛋白活性的检测 | 第29-30页 |
| ·再生几丁质的制备 | 第29页 |
| ·几丁质结合活性 | 第29页 |
| ·各洗脱液洗脱能力分析 | 第29-30页 |
| ·应用RNAi 技术进行seIIm8 基因沉默 | 第30-31页 |
| ·设计引物 | 第30页 |
| ·制备并纯化dsRNA | 第30-31页 |
| ·选择合适的虫源注射dsRNA | 第31页 |
| ·提取不同时间段受试虫体的中肠组织 | 第31页 |
| ·中肠组织总RNA 的提取 | 第31页 |
| ·实时荧光定量PCR（qPCR）检测SeIIM8 的表达 | 第31-33页 |
| ·总RNA 的纯化及反转录 | 第31-32页 |
| ·qPCR | 第32-33页 |
| 3. 结果与分析 | 第33-41页 |
| ·SeIIM8 序列及结构域分析 | 第33-34页 |
| ·SeIIM8 真核表达系统的构建 | 第34-36页 |
| ·重组载体pFast-IIm8 的构建 | 第34-35页 |
| ·PCR 验证Bac-IIm8 | 第35页 |
| ·重组Bacmid 转染BTI-TN-5B1-4（HighFive）细胞 | 第35-36页 |
| ·SeIIM8 蛋白的真核表达 | 第36-37页 |
| ·SeIIM8 蛋白的几丁质结合活性 | 第37页 |
| ·RNAi 诱发seIIm8 基因沉默 | 第37-41页 |
| ·RNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第38-39页 |
| ·反转录cDNA 的检测 | 第39页 |
| ·qPCR | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 在读期间发表论文 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
